Méthodes d'étude des leucocytes dans le sang. Leucocytes (leucocytes)

01.07.2020

Quantification des leucocytes

Les leucocytes sont comptés à l'aide d'une caméra Goryaev et à l'aide de compteurs automatiques.

Numération des leucocytes à l'aide de l'appareil photo de Goryaev

Avec la méthode du tube à essai pour prélever du sang pour compter les leucocytes :

0,4 ml d'une solution d'acide acétique à 3-5%, teintée au bleu de méthylène, est versé dans un tube à essai. A l'aide d'une pipette capillaire, 20 μl de sang sont prélevés sur une goutte fraîche (dilution au 20), soufflés avec précaution dans un tube à essai avec un réactif, et la pipette est rincée. Le mélange est bien agité ;
une lamelle propre et sèche est frottée contre la chambre afin que des anneaux irisés se forment au point de contact ;
le sang dilué dans le tube à essai est bien mélangé. Une goutte de sang est prélevée avec le bout d'une tige de verre ronde et amenée au bord du verre dépoli de la chambre ;
après remplissage de la chambre, celle-ci est laissée 1 min au repos pour la sédimentation leucocytaire ;
compter les leucocytes à faible grossissement (lentille ×8 ou ×9, oculaire ×10 ou ×15) avec un champ de vision assombri (avec le condenseur abaissé ou le diaphragme rétréci);
pour obtenir des résultats satisfaisants, les leucocytes sont comptés dans 100 grands carrés.

Connaissant le volume du grand carré et le degré de dilution du sang, trouver le nombre de leucocytes dans 1 μl et 1 litre de sang. Le côté du grand carré est de 1/5 mm, la surface est de 1/25 mm2, le volume de l'espace au-dessus de ce carré est de 1/250 mm3.

Formule pour compter les leucocytes :

où B est le nombre de leucocytes dans 100 grands carrés ;
P - degré de dilution (20).

Contenu quantitatif des leucocytes

Norme : 4,0–9,0 × 10 9 /L

Une augmentation du nombre de leucocytes au-dessus de 9,0 × 10 9 / l est appelée
leucocytose, diminution de leur nombre en dessous de 4,0 × 10 9 /l - leucopénie. Cependant, même 3,5 × 10 9 dans 1 litre de leucocytes pour un certain nombre d'individus peuvent être la norme. Selon la littérature, ces personnes ont une résistance immunitaire accrue et elles sont moins susceptibles de tomber malades, ce qui, apparemment, s'explique par la nécessité pour la mise en œuvre de réactions immunitaires d'avoir une réserve de leucocytes dans les tissus, où il y a 50 à 60 fois plus que dans la circulation sanguine. Évidemment, c'est chez les individus sains ayant une faible teneur en leucocytes dans le sang périphérique que leurs réserves dans les tissus sont augmentées d'autant. Ce phénomène s'explique par un caractère héréditaire-familial ou une augmentation de l'influence du système nerveux parasympathique.

La leucopénie peut être fonctionnelle et organique.
La leucopénie fonctionnelle est associée à un dérèglement de l'hématopoïèse et s'observe :

avec certaines infections bactériennes et virales (fièvre typhoïde, grippe, variole, rubéole, maladie de Botkin, rougeole);
en action médicaments(sulfamides, analgésiques, anticonvulsivants, antithyroïdiens, cytostatiques et autres médicaments);
avec le travail musculaire, l'introduction d'une protéine étrangère, les influences nerveuses et thermiques, la famine, les conditions hypotoniques;
une fausse leucocytopénie peut être associée à une agrégation de leucocytes pendant le stockage à long terme du sang à température ambiante(plus de 4 heures).

La leucopénie organique, résultant de l'aplasie de la moelle osseuse et de son remplacement par du tissu adipeux, survient lorsque :

anémie aplastique;
agranulocytose;
forme leucopénique de leucémie;
certaines formes de lymphogranulomatose;
rayonnement ionisant;
hypersplénisme (primaire et secondaire);
collagénoses.

Leucocytose

La leucocytose est une réaction du système hématopoïétique à l'exposition à
facteurs exogènes et endogènes. Il existe des leucocytoses physiologiques et pathologiques.

La leucocytose physiologique est :

digestif - après avoir mangé, particulièrement riche en protéines; le nombre de leucocytes ne dépasse pas 10,0–12,0 × 10 9 /l et revient à la normale après 3–4 heures;
avec stress émotionnel (libération d'adrénaline), effort physique intense, refroidissement, exposition excessive au soleil ( coup de soleil), l'introduction d'un certain nombre d'hormones (catécholamines, glucocorticostéroïdes, etc.), dans la seconde moitié de la grossesse, pendant les menstruations et est due à une répartition inégale des leucocytes dans le sang.

La leucocytose pathologique est divisée en absolue et relative.

Leucocytose absolue- une augmentation du nombre de leucocytes dans le sang jusqu'à plusieurs centaines de milliers (100,0–600,0 × 10 9 /l et plus).

Le plus souvent observé dans la leucémie: dans la leucémie chronique - dans 98 à 100% des cas, avec Leucémie aiguë- dans 50-60%. La modification du rapport des cellules leucocytaires dans la moelle osseuse ponctuée et dans le sang sert de base au diagnostic de la leucémie.

Leucocytose relative observé:

dans les processus inflammatoires et infectieux aigus, à l'exception de la fièvre typhoïde, de la grippe, de la variole, de la rubéole, de la maladie de Botkin, de la rougeole. La plus grande leucocytose (jusqu'à 70,0–80,0 × 10 9 /l) est observée avec la septicémie ;
sous l'influence de substances toxiques (poisons d'insectes, endotoxines), rayonnements ionisants (immédiatement après l'exposition);
à la suite de l'action des corticostéroïdes, de l'adrénaline, de l'histamine, de l'acétylcholine, des préparations digitales;
avec dégradation tissulaire (nécrose), infarctus du myocarde, thrombose des artères périphériques avec développement de gangrène, brûlures, pleurésie exsudative, péricardite, urémie, coma hépatique;
perte de sang importante dans les plaies, saignements internes, gynécologiques et autres.

Une augmentation du nombre de leucocytes avec maladies infectieuses dans la plupart des cas, il s'accompagne d'un déplacement de la formule leucocytaire vers la gauche

Facteurs affectant l'exactitude de l'étude des leucocytes

cryoglobulinémie

Paraprotéinémie

Normoblastes

Agrégats plaquettaires

Érythrocytes non lysés

Stockage à long terme du sang à température ambiante

Nombre de globules blancs selon l'âge

1 jour 11.6 - 22.0

1 semaine 8.1.- 14.3

1 mois 7,6 – 12,4

1 an 6,8 - 11,0

Adultes 4.0 – 9.0

Méthodes de détermination du nombre de leucocytes dans le sang.

Comptage du nombre de leucocytes dans la chambre de comptage

Numération des leucocytes dans les analyseurs d'hématologie

Détermination du nombre de leucocytes dans la chambre de comptage.

Le comptage des leucocytes au microscope est réalisé après lyse des érythrocytes dans 100 grands carrés de la grille de comptage et recalculé pour 1 litre de sang, en fonction du volume des carrés et de la dilution du sang. La numération des leucocytes doit être effectuée dans les 2 à 4 heures suivant le prélèvement sanguin.

S'il y a des globules rouges nucléés dans le sang périphérique, ils ne sont pas lysés et comptés avec les leucocytes. Dans ce cas, pour déterminer le nombre réel de leucocytes, le nombre de cellules dans la rangée rouge est soustrait du nombre total de cellules comptées.

Par exemple : Le nombre total de leucocytes lors du comptage dans la chambre (ou sur l'analyseur) est de 45x109/l. Lors du calcul de la formule leucocytaire, il a été constaté qu'il y avait 50 érythroblastes (normoblastes) pour 100 leucocytes.

Nous calculons le nombre réel de leucocytes dans le sang :

150 cellules - 45 x 109/l

100 cellules (leucocytes) - X

X \u003d 100 * 45 * 10 / l / 150 \u003d 30 * 10 / l

Ainsi, le nombre réel de leucocytes dans le sang est de 30 x109/l.

Les principales sources d'erreur lors du comptage des leucocytes dans la chambre sont :

Rapport incorrect des volumes de sang et d'acide acétique prélevés dans un tube à essai.

Solution d'acide acétique mal préparée (à une concentration supérieure à 5%, une partie des leucocytes peut être lysée, ce qui entraînera une sous-estimation du résultat).

Exposition prolongée de l'échantillon à des températures supérieures à 28°C, pouvant accélérer la lyse des leucocytes dans l'échantillon et conduire à une sous-estimation du résultat.

Remplissage incorrect de la chambre Goryaev. Comme pour le nombre de RBC, la chambre doit être laissée pendant 1 minute pour que les cellules se déposent.

Insuffisamment bien lavé après la détermination précédente, la chambre de Goryaev. Les globules blancs restant dans la chambre peuvent surestimer les résultats de l'analyse.

Méthodes de numération plaquettaire

Dans la chambre de comptage

Frottis sanguins

Analyseur d'hématologie

Chaque groupe de méthodes présente des avantages et des inconvénients.

La numération plaquettaire dans la chambre est assez précise, ne nécessite pas le calcul du nombre de globules rouges. En revanche, cette méthode est plus laborieuse, car les plaquettes dans leur forme native sont des éléments petits et peu contrastés. L'inconvénient de la méthode est le comptage des plaquettes dans les heures qui suivent la prise de sang.

La précision de la détermination du nombre de plaquettes dans les frottis sanguins est nettement inférieure à celle de la méthode de la chambre ou des compteurs automatiques. Les erreurs de comptage dans les frottis sanguins peuvent être dues à une mauvaise qualité de frottis et à la répartition inégale des plaquettes associée, à une détermination inexacte du nombre de globules rouges. Un inconvénient important de la méthode est la nécessité d'un comptage simultané des plaquettes et des érythrocytes dans le sang. Son avantage est la possibilité d'étudier les plaquettes à tout moment, quel que soit le moment du prélèvement sanguin.

La méthode de détermination des plaquettes à l'aide d'un analyseur hématologique vous permet de déterminer avec précision le nombre de plaquettes, leur volume moyen et leur distribution en volume.

Dendrit.ru

Comptage des leucocytes dans une chambre de comptage

Le calcul du nombre de leucocytes est effectué selon la formule:

En pratique, pour calculer le nombre de leucocytes dans 1 μl de sang, leur nombre dans 100 grands carrés est multiplié par 50, et dans 1 litre, la valeur résultante est multipliée par 106.

Noter. Lors du comptage des leucocytes, une erreur est inévitable dans 6 à 8% des cas.

Causes des erreurs.

Avec un grand nombre de normocytes dans le sang périphérique, ils sont comptés comme des leucocytes (les leucocytes et les normocytes sont des cellules nucléées). Afin de déterminer correctement le nombre de leucocytes, le nombre de normocytes doit être soustrait du nombre total de cellules sanguines nucléées.
Les erreurs restantes sont similaires à celles qui se produisent lors du comptage du nombre d'érythrocytes dans la chambre de comptage.

Voir également:

Numération des leucocytes dans un analyseur d'hématologie (compteur automatique)

onlab.info

Détermination du nombre de leucocytes

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Méthode de comptage de chambre

Prélèvement et dilution du sang produit par la méthode du tube à essai. 0,4 ml de liquide de dilution et 0,02 ml de sang capillaire sont introduits dans un tube à essai (de préférence Vidalevsky). La dilution résultante est pratiquement considérée comme égale à 1: 20. Comme liquide de dilution, une solution à 3-5% d'acide acétique teinté de bleu de méthylène est généralement utilisée (l'acide acétique lyse les érythrocytes, le bleu de méthylène colore les noyaux des leucocytes). Avant de remplir la chambre Goryaev, le tube à essai avec du sang dilué est soigneusement secoué. La chambre est remplie de la même manière que pour le comptage des globules rouges.

Il y a beaucoup moins de leucocytes que d'érythrocytes (1-2 par grand carré), donc, pour plus de précision, le comptage est effectué sur 100 grands carrés (non marqués).

Calcul : les leucocytes ont été comptés dans 100 grands carrés (1600 petits). En se souvenant que le volume d'un petit carré est de 1/4000 mm3 et que le sang est dilué 20 fois, le nombre de leucocytes dans 1 μl de sang est calculé : 4000 * 20 et divisé par 1600 = a * 1/2. En pratique, pour obtenir la teneur réelle en leucocytes dans 1 μl de sang, il suffit de diviser par deux le nombre obtenu lors du calcul et d'attribuer 2 zéros. L'erreur moyenne de la méthode est de ± 7 %.

Plus précis (erreur 2-3%) et parfait est le comptage des leucocytes à l'aide d'appareils électroniques. Le comptage des leucocytes dans les compteurs de particules s'effectue selon le même principe que pour les érythrocytes. Le sang est préalablement dilué et mélangé avec un réactif de lyse des érythrocytes. Dans l'autoanalyseur Technikon, une solution d'acide acétique est utilisée telle quelle, dans les appareils Coulter et Celloscope, de la saponine ou de la sapoglobine, qui sont ajoutées diluées (1 : 500, 1 : 700) dans une solution isotonique de chlorure de sodium (6 gouttes pour 20 ml reproduction).

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Numération leucocytaire et formule leucocytaire.

Pour compter les leucocytes, le sang est dilué dans des mélangeurs ou dans des éprouvettes. A cet effet, une solution à 3-5% d'acide acétique est utilisée (pour la destruction des érythrocytes), teintée avec une sorte de colorant à l'aniline (pour colorer les noyaux des leucocytes). La grille de comptage est remplie de la même manière que pour le comptage des érythrocytes. Les leucocytes sont comptés dans 100 grands carrés. Dans la grille de Goryaev, il convient de les compter en carrés non délimités (il y en a 100 sur la grille). Compte tenu de la dilution du sang et du volume de liquide au-dessus des carrés, un multiplicateur constant est calculé. Dilué 20 fois, c'est 50.

Lorsque vous travaillez avec des tubes à essai, 0,38 ml de liquide y est d'abord versé et 0,02 ml de sang y est libéré. Pour le comptage dans des tubes de comptage automatique, les érythrocytes sont hémolysés avec de la saponine. La teneur normale en leucocytes est de 4,3 109-11,3 109/l, soit 4300-11 300 dans 1 μl de sang.

La formule leucocytaire est comptée dans les frottis colorés.

Un bon frottis répond aux exigences suivantes: il est mince et les éléments façonnés s'y trouvent en une seule couche; dans ce cas, le frottis est jaune et translucide. Un bon frottis est uniforme et les cellules ne sont pas endommagées par le frottis. Pour que le sang se dépose en une couche uniforme sur le verre, il est dégraissé en le brûlant au-dessus d'une flamme. brûleur à gaz ou conservé dans un mélange d'alcool et d'éther. L'extrémité du verre est touchée par une petite goutte de sang fraîchement libérée et sans tarder l'étale sur le verre. Avant coloration, le frottis est fixé par immersion dans du méthanol pendant 3 minutes, dans de l'alcool éthylique ou son mélange avec de l'éther pendant 30 minutes. Il existe également un certain nombre d'autres attaches. Séché après fixation, le frottis est rempli de colorant.

Pour distinguer les cellules sanguines (détermination de la formule leucocytaire), ils ont recours à la coloration différentielle. La plus utilisée est la coloration de Romanovsky-Giemsa. Ce colorant est un mélange de peintures légèrement acides (éosine) et légèrement alcalines (azur II). Les cellules et leurs parties, en fonction de la réaction de l'environnement en elles, perçoivent l'un ou l'autre composant du colorant: les substances acides (basophiles) sont colorées d'azur en bleu, les alcalines (oxyphiles) sont colorées d'éosine en rouge; les neutres prennent les deux couleurs et deviennent violets.

La formule leucocytaire s'appelle pourcentage formes individuelles de leucocytes sanguins.

Attention, pour un calcul assez précis, il faut regarder au moins 200 leucocytes.

Le comptage se fait avec un système à immersion. En raison du fait que les cellules sont inégalement réparties dans le frottis (les plus grandes vont vers les bords), il est important de respecter un tel ordre de mouvement le long du frottis, dans lequel ses bords et son milieu seraient également visibles. L'une des deux méthodes de déplacement est utilisée : selon l'une d'entre elles, le trait est déplacé du bord supérieur vers le bas, déplacé de 2 à 3 champs de vision le long du bord, puis va dans le sens opposé au bord supérieur, etc. Dans la deuxième méthode, ils se déplacent du bord de 5 à 6 champs jusqu'au milieu du trait, puis du même nombre sur le côté, puis reviennent au bord, déplacent quelques champs sur le côté et répètent à nouveau le mouvement jusqu'à ce que 50 cellules sont comptées. 4 de ces zones sont visualisées aux 4 coins du frottis. Après avoir compté 200 cellules, le nombre est divisé en deux et le nombre de chaque type de leucocyte est déterminé.

Les leucocytes sont des éléments du sang qui répondent rapidement à divers influences externes et les changements dans le corps. La détermination du nombre total de leucocytes peut avoir une grande valeur diagnostique, car elle révèle l'état des organes hématopoïétiques ou leur réponse aux effets nocifs. Une augmentation du nombre de leucocytes - leucocytose - est le résultat de l'activation de la leucopoïèse, une diminution de leur nombre - leucopénie - peut dépendre de l'inhibition des organes hématopoïétiques, de leur déplétion, de la décroissance accrue des leucocytes sous l'action des anticorps antileucocytaires 1. Neutrophiles. Le groupe de leucocytes le plus variable est celui des neutrophiles, dont le nombre augmente avec de nombreuses infections, intoxications et dégradations des tissus.

La caractéristique de la neutropoïèse active n'est pas seulement une augmentation du nombre total de neutrophiles dans le sang, mais également l'apparition de formes immatures dans celui-ci: le nombre de cellules stab augmente, de jeunes neutrophiles apparaissent, parfois même des myélocytes. Ce "rajeunissement" de la composition des neutrophiles s'appelle le déplacement de la formule leucocytaire vers la gauche. Le rôle protecteur des neutrophiles est déterminé par leur fonction phagocytaire, leur action bactéricide et la libération d'enzymes protéolytiques qui favorisent la résorption des tissus nécrotiques et la cicatrisation des plaies.

Le plus souvent, un changement régénératif apparaît en présence de tout processus inflammatoire ou foyer de nécrose. Un déplacement très net vers la gauche vers les promyélocytes et même les myéloblastes présentant une leucocytose importante est appelé réaction leucémique. Une diminution du nombre de neutrophiles - neutropénie absolue - se produit lorsque la moelle osseuse est supprimée par les effets des toxines de certains micro-organismes (agents responsables de la fièvre typhoïde, de la brucellose, etc.) et des virus, des rayonnements ionisants et d'un certain nombre de médicaments.

2. Lymphocytes. La lymphocytose est observée pendant la période de récupération des maladies infectieuses aiguës, avec la mononucléose infectieuse, la lymphocytose infectieuse, la lymphocytose, la rubéole, la brucellose, la thyrotoxicose.

La lymphopénie absolue survient avec le mal des rayons, des lésions systémiques de l'appareil lymphatique: lymphogranulomatose, lymphosarcome.

3. Éosinophiles. On les trouve dans le sang en quantité relativement faible (essentiellement contenues dans les tissus), mais leur nombre augmente, parfois de manière significative, avec les processus allergiques (maladie sérique, asthme bronchique), les invasions helminthiques et les dermatoses prurigineuses.

Une diminution du nombre d'éosinophiles - éosinopénie - jusqu'à leur disparition complète est observée avec la septicémie, formes sévères tuberculose, typhus, intoxication grave.

4. Basophiles. Ils sont porteurs d'importants médiateurs du métabolisme tissulaire (« équivalents » sanguins des mastocytes). Avec la sensibilisation du corps, leur nombre augmente, avec l'introduction répétée de l'allergène, il diminue fortement en raison de leur décomposition.

5. Monocytes. Une augmentation du nombre de monocytes - monocytose - est un indicateur du développement de processus immunitaires. Les monocytes sont reconnus comme analogues des macrophages tissulaires. Le monocyte est présent dans un certain nombre de maladies chroniques (chroniosepsie, tuberculose, syphilis). La monocytopénie est parfois observée dans les formes septiques sévères hypertoxiques de la fièvre typhoïde.

Agranulocytes. Particularité les agranulocytes sont un noyau non segmenté et un cytoplasme basophile (bleu).

Le lymphocyte est le plus petit globule blanc. Le noyau est rond, ovale ou en forme de haricot; occupe la majeure partie de la cellule, intensément colorée. Le cytoplasme de la plupart des lymphocytes entoure le noyau d'un bord étroit, est coloré en bleu clair et devient clair vers le noyau.

Le monocyte est la plus grande des cellules sanguines. Un gros noyau de forme irrégulière et de couleur relativement claire. Le cytoplasme est bleu grisâtre, de couleur fumée, ne s'éclaircit pas jusqu'au noyau

En plus de ces cellules, les plasmocytes sont rares dans le sang normal, et dans les maladies, les plasmocytes peuvent souvent être trouvés. Ils se distinguent par un noyau dense situé de manière excentrique, souvent d'une structure en forme de roue. Le nombre de ces cellules augmente dans certaines maladies infectieuses, la septicémie des plaies, le myélome multiple.

Lors du calcul de la formule leucocytaire, l'attention est portée non seulement sur les modifications quantitatives de celle-ci, mais également sur les modifications qualitatives des éléments façonnés. Auparavant, des changements dégénératifs dans les leucocytes ont été notés. En cas d'intoxication sévère, la granularité des neutrophiles devient abondante, volumineuse, intensément colorée et est dite toxique (ou toxogène). Parfois, des taches floues se trouvent dans les frottis sanguins, colorées comme la substance nucléaire des leucocytes. Ce sont les soi-disant ombres Botkin-Gumprecht - les restes de chromatine nucléaire, indiquant une fragilité accrue des leucocytes, conduisant à leur décomposition - leucocytolyse

99. Méthodologie de détermination du groupe sanguin, le concept du facteur Rh.

1. Détermination du groupe sanguin selon les sérums standards :

L'équipement suivant est requis :

o deux séries de sérums hémagglutinants standards I (0), II (A), III (B) de groupes de deux séries différentes et une ampoule de sérum IV (AB)

o un flacon de solution isotonique de chlorure de sodium avec une pipette

o une assiette propre et sèche

o lames de verre

o aiguilles stériles en forme de lance pour percer la pulpe du doigt

o boules de gaze stériles,

Les sérums standards pour la détermination du groupe sanguin selon le système ABO sont produits avec une certaine code de couleurs: I (0) - incolore, II (A) - bleu, III (B) - rouge, IV (AB) - jaune. Le sérum est conservé à une température de 4 à 10 °C. Le sérum doit être léger et transparent. La présence de flocons, de sédiments, de turbidité sont des signes de l'inadéquation du sérum. Les premiers signes d'agglutination doivent apparaître au plus tard 30 s.

La plaque est divisée en 4 cases avec un crayon de couleur et les cases I (0), II (A), III (B) sont marquées dans le sens des aiguilles d'une montre. Une grosse goutte de sérum de deux séries de groupes I (0), II (A), W (B) est appliquée sur le carré correspondant de la plaque avec une pipette. La pulpe du doigt est traitée avec de l'alcool et la peau est perforée avec une aiguille. La première goutte de sang est retirée avec une boule de gaze, les gouttes suivantes sont introduites dans des gouttes de sérum dans différents coins de la lame de verre et mélangées soigneusement. Une goutte de sang introduite doit être 5 à 10 fois plus petite qu'une goutte de sérum. Puis, en agitant la plaque, bien mélanger le sang avec le sérum. Les résultats préliminaires sont évalués après 3 minutes, après quoi une goutte de solution de chlorure de sodium isotonique est ajoutée, mélangée à nouveau en agitant la plaque et après 5 minutes, l'évaluation finale de la réaction d'agglutination est effectuée.

Avec une réaction positive d'isohémagglutination, les flocons et les grains d'érythrocytes collés ensemble ne se dispersent pas lorsqu'une solution isotonique de chlorure de sodium est ajoutée et mélangée.

Avec une réaction négative, les gouttes de sérum sur une plaque sont transparentes, uniformément Couleur rose, ne contiennent ni flocons ni grains.

Les 4 combinaisons suivantes de réactions d'agglutination avec des sérums standards des groupes I (0), II (A), III (B) sont possibles.

v Les 3 sérums des deux séries ne se sont pas agglutinés. Sang testé -

v La réaction d'isohémagglutination est négative avec les sérums des groupes P (A) des deux séries et positive avec les sérums des groupes I (0) et III (B). Sang étudié -

II (A) groupes.

v La réaction d'isohémagglutination est négative avec le sérum des groupes III (B) dans les deux séries et positive avec le sérum des groupes I (0) et II (A). Sang testé -

III (B) groupes.

v Les groupes sériques I (0), II (A), III (B) donnent une réaction positive dans les deux séries. Le sang appartient au groupe IV (AB). Mais avant de donner une telle conclusion, il est nécessaire de réaliser une réaction d'isohémagglutination avec du sérum standard du groupe IV (AB) selon la même méthode. La réaction négative d'isohémagglutination permet d'attribuer finalement le sang étudié au groupe IV (AB).

2. Le concept du facteur Rh.

Dans les érythrocytes, un autre antigène (agglutinogène) a été trouvé, appelé facteur Rh (Rh). Toutes les personnes sont divisées en personnes ayant du sang Rh-positif (Rh+) et Rh-négatif (Rh). Il a été établi que 85% des personnes dans les érythrocytes contiennent le facteur Rh, c'est-à-dire que leur sang est Rh positif, et 15% ne le contiennent pas, c'est-à-dire que le sang de ces personnes est Rh négatif. Il n'y a pas d'agglutinines anti-Rh (anticorps prêts à l'emploi) dans le sang contre le facteur Rh (antigène Rh). De tels anticorps n'apparaissent dans le sérum sanguin qu'à la suite de l'immunisation d'une personne ayant du sang Rh négatif avec des globules rouges Rh positifs. Une telle immunisation se produit à la suite de transfusions répétées de sang Rh positif à un receveur Rh négatif ou pendant la grossesse d'une femme avec du sang Rh négatif à un fœtus Rh positif. Les personnes immunisées de cette manière deviennent sensibilisées: lorsqu'elles sont transfusées avec du sang Rh positif, une complication grave se développe - le choc hémotransfusionnel.

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Leucocytes. La norme est de (4–9) x109 / l de sang. Leur nombre dépend du taux de formation dans les ganglions lymphatiques, la rate et la moelle osseuse, de la mobilisation à partir de la moelle osseuse, de l'utilisation et de la migration dans les tissus, de la capture par les poumons et la rate et de facteurs physiologiques. La fonction principale des granulocytes (principalement des neutrophiles) est phagocytaire - la capture et la digestion de matières étrangères à l'aide d'enzymes hydrolytiques. Lors de l'évaluation du nombre de leucocytes dans la clinique, la formule leucocytaire est utilisée - le pourcentage de formes individuelles de leucocytes. Normalement, cette valeur est constante.

Formule leucocytaire

Une augmentation du nombre de leucocytes jusqu'à plusieurs dizaines de milliers indique leucocytose et est observé dans les maladies inflammatoires et infectieuses aiguës, accompagné d'un déplacement de la formule leucocytaire vers la gauche. Une augmentation du nombre de leucocytes à plusieurs centaines de milliers indique une leucémie. Dans les maladies infectieuses graves, la morphologie des neutrophiles change: on note une dégranulation, une vacuolisation, etc.. Une diminution du nombre de leucocytes en dessous de 4000 indique leucopénie le plus souvent agranulocytose. Une diminution du nombre de globules blancs peut être associée à l'utilisation de divers médicaments, à l'augmentation du fond radioactif, à l'urbanisation, etc. Neutropénie se manifeste sous l'influence des cytostatiques, avec le lupus, la polyarthrite rhumatoïde, le paludisme, la salmonellose, la brucellose, en tant que syndrome spécifique - avec le SIDA et les radiations.

Les leucocytes sont neutrophiles. Le contenu dans le sang - 50-75% (2,2-4,2) x109 / l. Diamètre –10–12 µm.

Le noyau est compact, se compose de 3 à 4 segments reliés par des ponts; cytoplasme avec une granularité abondante. Dans les infections et les inflammations, les neutrophiles remplissent la fonction de macrophages - des cellules capables de phagocytose.

Leucocytes éosinophiles. La norme est de 1 à 5% de leucocytes, (0,1 à 0,3) x109 / l. Les cellules sont plus grandes que les neutrophiles, diamètre jusqu'à 12 microns. Le noyau se compose généralement de 2-3 segments. Le cytoplasme est légèrement basophile, contient de grandes, brillamment colorées avec une granularité d'éosine, donnant des réactions positives d'oxydase, de peroxydase, de cytochrome oxydase, de succinate déshydrogénase et de phosphatase acide. Ils sont capables de phagocytose, participent à la détoxification des produits protéiques et aux réactions allergiques du corps.L'éosinophilie est caractéristique des helminthiases, elle est possible au stade de la guérison des maladies infectieuses.

Les leucocytes sont basophiles. La teneur dans le sang est de 0-1% (jusqu'à 0,06x109 / l). Diamètre de 8 à 12 microns. Le noyau est large et de forme irrégulière. Le cytoplasme contient une grande granularité, colorée métachromatiquement dans des tons violet-noir. Participer aux réactions allergiques (types immédiats et différés) : produire de l'histamine et de l'héparine (un groupe d'héparinocytes).

Monocytes/macrophages. La norme est de 2 à 10% de leucocytes, (0,2 à 0,55) x109 / l. Tailles de 12 à 20 microns. Le noyau est gros, lâche, avec une répartition inégale de la chromatine. Ils circulent dans le sang pendant une courte période, passent dans les tissus, se transforment en macrophages et sont capables de mouvements amiboïdes. Cellules principales de la réponse immunitaire de l'organisme. La fonction principale est l'endocytose. Ils sont le maillon central du système phagocytaire mononucléaire. Ils remplissent un certain nombre de fonctions dépendantes des cytokines : hématopoïétiques, immunostimulantes, pro-inflammatoires, immunosuppressives et anti-inflammatoires.

Produits de sécrétion de macrophages :

Protéases : activateur du plasminogène, collagénase, élastase, angiotensine convertase.

Médiateurs de l'inflammation et de l'immunomodulation : interleukine-1 (IL-1), facteur de nécrose tumorale α, interféron γ, lysozyme, facteur d'activation des neutrophiles, composants du complément C1, C2, C3, C5, properdine, facteurs B, D, IL-3, IL-6, IL- 8, IL-10, IL-12, IL-15.

Facteurs de croissance: CSF-GM, CSF-G, CSF-M, facteur de croissance des fibroblastes, facteur de croissance transformant.

Inhibiteurs du facteur de coagulation et de la fibrinolyse : V, VII, IX, X, inhibiteurs du plasminogène, inhibiteurs de la plasmine.

Adhésifs : fibronectine, thrombospondine, protéoglycanes.

Méthode de comptage de chambre

Il y a beaucoup moins de leucocytes que d'érythrocytes (1-2 par grand carré), donc, pour plus de précision, le comptage est effectué sur 100 grands carrés (non marqués).

Calcul: dans 100 grands carrés (1600 petits) un nombre de leucocytes a été compté. En se souvenant que le volume d'un petit carré est de 1/4000 mm 3 et que le sang est dilué 20 fois, le nombre de leucocytes dans 1 μl de sang est calculé : 4000 * 20 et divisé par 1600 = a * 1/2. En pratique, pour obtenir la teneur réelle en leucocytes dans 1 μl de sang, il suffit de diviser par deux le nombre obtenu lors du calcul et d'attribuer 2 zéros. L'erreur moyenne de la méthode est de ± 7 %.

12. Fonctions des granulocytes. Le rôle des lymphocytes T et B dans la création de mécanismes spécifiques d'immunité :

cellules principales système immunitaire sont des lymphocytes T et B qui circulent dans la circulation sanguine et le système lymphatique, se déplaçant constamment d'une partie du système immunitaire à une autre, ont la capacité de pénétrer dans les tissus pour remplir des fonctions de protection (Fig. 1).

Outre les lymphocytes T et B, les réactions protectrices de l'immunité spécifique impliquent les cellules phagocytaires (granulocytes, monocytes, macrophages), les "natural killers", les mastocytes, les cellules endothéliales et épithéliales, qui jouent le rôle d'auxiliaire, interagissant avec les T- et les lymphocytes B.

La réponse immunitaire consiste en une série complexe d'interactions cellulaires activées par l'entrée de matériel antigénique étranger dans le corps. Premièrement, le macrophage capture l'organisme porteur de l'antigène. Ensuite, le macrophage clive une partie de l'antigène (peptide) et l'amène à sa surface, comme s'il le présentait aux cellules immunitaires. L'activation d'un lymphocyte par un antigène conduit à la prolifération et à la transformation des lymphocytes.

Lymphocytes sont les seules cellules du corps capables de reconnaître spécifiquement les antigènes du soi et étrangers et de répondre par une activation au contact avec un antigène spécifique. De morphologie très proche, les lymphocytes se divisent en deux populations qui ont des fonctions différentes et produisent des protéines différentes.

Une des populations a été nommée Lymphocytes B. Chez l'homme, les lymphocytes B mûrissent dans la moelle osseuse. Les lymphocytes B reconnaissent les antigènes par des récepteurs spécifiques de type immunoglobuline qui, à mesure que les lymphocytes B mûrissent, apparaissent sur leurs membranes. Les lymphocytes B sont capables de reconnaître et de se lier aux antigènes solubles dans les protéines, les polysaccharides et les lipoprotéines.La fonction principale des lymphocytes B est la reconnaissance spécifique d'un antigène. La reconnaissance de l'antigène conduit à l'activation, à la prolifération et à la transformation des lymphocytes B en plasmocytes - producteurs d'anticorps spécifiques - immunoglobulines. Ainsi formé réponse immunitaire humorale. Le plus souvent, les lymphocytes B ont besoin de l'aide des lymphocytes T sous forme de production de cytokines activatrices pour développer une réponse immunitaire humorale.

Une autre population a été appelée lymphocytes T en relation avec la différenciation de leurs précurseurs dans le thymus. Les lymphocytes T remplissent la fonction la plus importante de reconnaissance spécifique et de liaison à l'antigène. Les lymphocytes T activés par des antigènes prolifèrent et se transforment en diverses sous-populations, qui participent en outre à toutes les formes de réponse immunitaire. Un lymphocyte T activé produit et sécrète également des cytokines qui améliorent les processus d'augmentation du nombre de lymphocytes T eux-mêmes, de lymphocytes B et de macrophages.

Parmi les lymphocytes T matures, on distingue deux sous-populations principales : les T-helpers (CD4+) et les T-killers - lymphocytes T cytotoxiques (CD8+). Le marquage "CD" est une caractéristique du "phénotype cellulaire de surface" - "cluster of differentiation" (de l'anglais clusters of differentiation - CD).

Il existe un autre type de lymphocytes - les grands lymphocytes granulaires, qui diffèrent des lymphocytes T et B plus petits non seulement par leurs caractéristiques structurelles, mais également par l'absence d'un récepteur reconnaissant l'antigène. Ces cellules sont appelées "tueurs naturels": ils sont capables de tuer des cellules cibles ou des cellules tumorales infectées par divers virus (voir Tableau 1).

Tableau 1. Classification des lymphocytes humains

Cellules T effet destructeur sur les objets suivants :

1. Cellules malignes.

2. Cellules infectées par des micro-organismes.

3. Organes et tissus transplantés.

La cellule entière est impliquée dans l'attaque, donc la réponse s'appelle immunité cellulaire.

Ainsi, il existe deux principaux types de réponse immunitaire :

· Immunité cellulaire c'est une fonction des lymphocytes T.

· immunité humorale- avec la participation des lymphocytes B.

Il existe une autre sous-population de lymphocytes T : les lymphocytes T régulateurs, les cellules T régulatrices (Treg), T-suppresseurs- régulateurs centraux de la réponse immunitaire. Leur fonction principale est de contrôler la force et la durée de la réponse immunitaire par la régulation de la fonction des cellules T effectrices (cellules T auxiliaires et cellules T cytotoxiques).

Riz. 2. Schéma général de la réponse immunitaire

Le phénomène de suppression de la réponse immunitaire est connu depuis longtemps, mais ses mécanismes n'étaient pas connus. Par conséquent, l'existence de cellules T-suppresseurs spécifiques a été suggérée, mais l'existence de ces cellules n'a pas été confirmée expérimentalement pendant longtemps. Ce n'est qu'à la fin des années 1990 et au début des années 2000 que certaines cellules T se sont révélées avoir un phénotype CD25+FOXP3+ et supprimer efficacement la réponse immunitaire.

13. l'immunité, ses mécanismes non spécifiques et spécifiques :

Adaptatif ( obsolète acquise, spécifique) a la capacité de reconnaître et de répondre à des antigènes individuels, se caractérise par une réponse clonale, des cellules lymphoïdes sont impliquées dans la réaction, il existe une mémoire immunologique et une auto-agression est possible.

classés en actifs et passifs.

L'immunité active acquise survient après une maladie ou après l'administration d'un vaccin.
L'immunité passive acquise se développe lorsque des anticorps prêts à l'emploi sont introduits dans le corps sous forme de sérum ou transférés à un nouveau-né avec du colostrum maternel ou in utero.

Une autre classification divise l'immunité en naturelle et artificielle.

L'immunité naturelle comprend l'immunité innée et acquise active (après une maladie), ainsi que l'immunité passive lorsque les anticorps sont transférés à l'enfant par la mère.
L'immunité artificielle comprend l'acquis actif après vaccination (vaccination) et l'acquis passif (administration de sérum).

L'immunité innée (non spécifique) est due à la capacité d'identifier et de neutraliser une variété d'agents pathogènes en fonction de leurs caractéristiques communes les plus conservatrices, la distance de la relation évolutive, avant la première rencontre avec eux. En 2011, le prix Nobel de médecine et de physiologie a été décerné pour l'étude de nouveaux mécanismes de l'immunité innée (Ralph Steinman, Jules Hoffman et Bruce Boettler).

Elle est réalisée majoritairement par des cellules de la série myéloïde, n'a pas de spécificité stricte pour les antigènes, n'a pas de réponse clonale et n'a pas de mémoire du contact initial avec un agent étranger.

14. Système mononucléaire-phagocytaire :

Système phagocytaire mononucléaire(Grec monox un + lat. noyau nucléos : phagos grecs dévorant, absorbant + gistol. cellule sutus ; synonyme : système macrophage, système monocyte-macrophage) - un système de défense physiologique des cellules qui ont la capacité d'absorber et de digérer les matières étrangères. Les cellules qui composent ce système ont une origine commune, se caractérisent par des similitudes morphologiques et fonctionnelles et sont présentes dans tous les tissus de l'organisme.

La base du concept moderne du système des phagocytes mononucléaires est la théorie phagocytaire développée par I.I. Mechnikov à la fin du 19ème siècle, et l'enseignement du pathologiste allemand Aschoff (K. A. L. Aschoff) sur le système réticulo-endothélial (RES). Initialement, RES a été identifié morphologiquement comme un système de cellules corporelles capables d'accumuler le colorant vital carmin. Sur cette base, les histiocytes du tissu conjonctif, les monocytes sanguins, les cellules de Kupffer du foie, ainsi que les cellules réticulaires des organes hématopoïétiques, les cellules endothéliales des capillaires, les sinus de la moelle osseuse et les ganglions lymphatiques ont été affectés au RES. Avec l'accumulation de nouvelles connaissances et l'amélioration méthodes morphologiques recherche, il est devenu clair que les idées sur le système réticulo-endothélial sont vagues, non spécifiques, et dans un certain nombre de dispositions sont tout simplement erronées. Ainsi, par exemple, les cellules réticulaires et l'endothélium des sinus de la moelle osseuse et des ganglions lymphatiques longue durée le rôle d'une source de cellules phagocytaires a été attribué, ce qui s'est avéré incorrect.

Il est maintenant établi que les phagocytes mononucléaires proviennent des monocytes sanguins circulants. Les monocytes mûrissent dans la moelle osseuse, puis pénètrent dans la circulation sanguine, d'où ils migrent vers les tissus et les cavités séreuses, devenant des macrophages. Les cellules réticulaires remplissent une fonction de soutien et créent le soi-disant microenvironnement pour les cellules hématopoïétiques et lymphoïdes. Les cellules endothéliales assurent le transport des substances à travers les parois des capillaires. Les cellules réticulaires et l'endothélium vasculaire ne sont pas directement liés au système de protection des cellules. En 1969, lors d'une conférence à Leiden consacrée au problème du RES, le concept de "système réticulo-endothélial" a été reconnu comme obsolète. Au lieu de cela, le concept de "système de phagocytes mononucléaires" est adopté. Ce système comprend les histiocytes du tissu conjonctif, les cellules de Kupffer du foie (réticuloendothéliocytes étoilés), les macrophages alvéolaires des poumons, les macrophages des ganglions lymphatiques, la rate, la moelle osseuse, les macrophages pleuraux et péritonéaux, les ostéoclastes du tissu osseux, la microglie du tissu nerveux. , synoviocytes des membranes synoviales, cellules de Langergais de la peau, dendrocytes granuleux non pigmentés. Il y a des gratuits, c'est-à-dire se déplaçant à travers les tissus et les macrophages fixes (résidents), ayant une place relativement permanente.

Les macrophages des tissus et des cavités séreuses, selon la microscopie électronique à balayage, ont une forme proche de sphérique, avec une surface pliée inégale formée par la membrane plasmique (cytolemme). Dans des conditions de culture, les macrophages s'étalent à la surface du substrat et acquièrent une forme aplatie, et lorsqu'ils se déplacent, ils forment de multiples pseudopodes polymorphes.

Une caractéristique ultrastructurale caractéristique d'un macrophage est la présence dans son cytoplasme de nombreux lysosomes et phagolysosomes, ou vacuoles digestives. Les lysosomes contiennent diverses enzymes hydrolytiques qui assurent la digestion de la matière absorbée. Les macrophages sont des cellules sécrétoires actives qui libèrent des enzymes, des inhibiteurs et des composants complémentaires dans l'environnement. Le principal produit de sécrétion des macrophages est le lysozyme. Les macrophages activés sécrètent des protéinases neutres (élastase, collagénase), des activateurs du plasminogène, des facteurs du complément tels que C2, C3, C4, C5 et l'interféron.

Les cellules du système phagocytaire mononucléaire ont un certain nombre de fonctions, qui sont basées sur leur capacité à l'endocytose, c'est-à-dire absorption et digestion des particules étrangères et des liquides colloïdaux. Grâce à cette capacité, ils remplissent une fonction de protection. Par chimiotaxie, les macrophages migrent vers les foyers d'infection et d'inflammation, où ils effectuent la phagocytose des micro-organismes, leur destruction et leur digestion. Dans des conditions d'inflammation chronique, des formes particulières de phagocytes peuvent apparaître - cellules épithélioïdes (par exemple, dans un granulome infectieux) et cellules multinucléées géantes du type cellulaire Pirogov-Langhans et du type cellulaire à corps étranger. qui sont formés par la fusion de phagocytes individuels en un polycaryon - une cellule multinucléaire. Dans les granulomes, les macrophages produisent la glycoprotéine fibronectine, qui attire les fibroblastes et contribue au développement de la sclérose.

Les cellules du système des phagocytes mononucléaires participent aux processus immunitaires.

Ainsi, une condition indispensable au développement d'une réponse immunitaire dirigée est l'interaction primaire d'un macrophage avec un antigène. Dans ce cas, l'antigène est absorbé et transformé par le macrophage en une forme immunogène. La stimulation immunitaire des lymphocytes se produit par contact direct avec un macrophage porteur d'un antigène converti. La réponse immunitaire dans son ensemble est réalisée sous la forme d'une interaction complexe en plusieurs étapes des lymphocytes G et B avec les macrophages.

Les macrophages ont une activité antitumorale et présentent des propriétés cytotoxiques contre les cellules tumorales. Cette activité est particulièrement prononcée dans les macrophages dits immuns, qui lysent les cellules cibles tumorales au contact de lymphocytes T sensibilisés porteurs d'anticorps cytophiles (lymphokines).

Les cellules du système des phagocytes mononucléaires sont impliquées dans la régulation de l'hématopoïèse myéloïde et lymphoïde. Ainsi, des îlots hématopoïétiques dans la moelle osseuse rouge, la rate, le foie et le sac vitellin de l'embryon se forment autour d'une cellule spéciale - le macrophage central, qui organise l'érythropoïèse de l'îlot érythroblastique. Les cellules de Kupffer du foie sont impliquées dans la régulation de l'hématopoïèse en produisant de l'érythropoïétine. Les monocytes et les macrophages produisent des facteurs qui stimulent la production de monocytes, de neutrophiles et d'éosinophiles. Dans le thymus (thymus) et les zones dépendantes du thymus des organes lymphoïdes, on a trouvé les cellules dites interdigitées - des éléments stromaux spécifiques, également liés aux systèmes de phagocytes mononucléaires, responsables de la migration et de la différenciation des lymphocytes.

La fonction métabolique des macrophages est leur participation au métabolisme du fer.

Dans la rate et la moelle osseuse, les macrophages réalisent l'érythrophagocytose, tandis qu'ils accumulent du fer sous forme d'hémosidérine et de ferritine, qui peuvent être réutilisés par les érythroblastes.

15. Leucocyte et ses types. Leucopénie :

Formule leucocytaire- c'est le pourcentage de certains types de leucocytes dans le sang périphérique. La formule leucocytaire est modifiée d'une certaine manière, typique de chaque maladie spécifique. Leucocytes à diverses maladies, plus souvent avec des infections, changent quantitativement.

Une augmentation du nombre de leucocytes est une leucocytose, une diminution est une leucopénie.

La leucocytose peut être physiologique et pathologique, la première survient chez personnes en bonne santé, le second - dans certaines conditions douloureuses. Leucocytose - changement composition cellulaire sang, caractérisé par une augmentation du nombre de leucocytes. La norme des leucocytes dans le sang est de 3,5 à 8,8 × 109 / l, mais ce chiffre peut varier vers le haut ou vers le bas, selon le laboratoire et les méthodes utilisées.

La leucocytose peut être physiologique et pathologique, la première survenant chez des personnes en bonne santé, la seconde - dans certains états pathologiques. Physiologiques comprennent la leucocytose alimentaire (après avoir mangé), myogénique (après un effort physique), la leucocytose des femmes enceintes, etc. La leucocytose pathologique est causée par la réaction des organes hématopoïétiques à une irritation causée par des agents infectieux, toxiques, purulents-inflammatoires, des radiations et d'autres agents. On l'observe également lors de nécrose tissulaire (infarctus du myocarde, décroissance tumorale), après des saignements importants, des blessures, des traumatismes crâniens, etc. En règle générale, la leucocytose disparaît avec la cause qui l'a provoquée. La leucocytose transitoire, caractérisée par l'apparition de leucocytes immatures dans le sang, est appelée réaction leucémique.

Leucopénie- une diminution du nombre de leucocytes dans le sang dans certaines maladies infectieuses et autres, ainsi qu'à la suite de lésions par rayonnement, de médicaments ou d'effets réflexes sur la moelle osseuse.

Les dommages causés par les radiations, le contact avec un certain nombre de produits chimiques (benzène, arsenic, DDT, etc.) entraînent une leucopénie ; prendre des médicaments (agents cytostatiques, certains types d'antibiotiques, sulfamides, etc.). La leucopénie survient avec des infections virales et bactériennes graves, des maladies du système sanguin.

Avec la leucopénie, il est nécessaire de déterminer avec précision la cause de la maladie. Outre les infections virales et les maladies des organes hématopoïétiques, la cause de la leucopénie peut être effet secondaire les médicaments allopathiques, car un certain nombre de médicaments ont un effet toxique sur la moelle osseuse et peuvent provoquer une leucopénie et une agranulocytose par des mécanismes allergiques.

Le traitement consiste à prescrire des médicaments qui stimulent le développement de nouveaux globules blancs ou stimulent la libération de globules blancs en cours de maturation.

16. Régulation de la leucopoïèse :

régulation de la leucopoïèse. La production de leucocytes est stimulée par les leucopoïétines, qui apparaissent après l'élimination rapide d'un grand nombre de leucocytes du sang. La nature chimique et le lieu de formation des leucopoïétines dans l'organisme n'ont pas encore été étudiés. La leucopoïèse est stimulée par les acides nucléiques, les produits de dégradation des tissus qui se produisent lorsqu'ils sont endommagés et enflammés, et certaines hormones. Ainsi, sous l'action des hormones hypophysaires - hormone corticotrope et hormone de croissance - le nombre de neutrophiles augmente et le nombre d'éosinophiles dans le sang diminue.

joue un rôle important dans la stimulation de la leucopoïèse système nerveux. L'irritation des nerfs sympathiques provoque une augmentation des leucocytes neutrophiles dans le sang. L'irritation prolongée du nerf vague provoque une redistribution des leucocytes dans le sang : leur contenu augmente dans le sang des vaisseaux mésentériques et diminue dans le sang des vaisseaux périphériques ; irritation et excitation émotionnelle augmenter le nombre de leucocytes dans le sang. Après avoir mangé, la teneur en leucocytes du sang circulant dans les vaisseaux augmente. Dans ces conditions, ainsi que lors de travaux musculaires et de stimuli douloureux, les leucocytes situés dans la rate et les sinus de la moelle osseuse pénètrent dans la circulation sanguine.

Le nombre de leucocytes sanguins peut être compté dans une chambre de comptage Burker avec une grille Goryaev ou dans des analyseurs automatiques électroniques («Celloscope», «Kulter», «Technikan»).

Technique de comptage dans la chambre de Burker avec la grille de Goryaev

Principe de la méthode : semblable à un tel comptage d'érythrocytes, son essence réside dans la mesure exacte du sang et sa dilution dans un certain volume de liquide, suivie du comptage des éléments cellulaires dans une chambre de comptage et du recalcul du résultat obtenu par 1 sang.

Matériel et réactifs :

mélangeurs ou tubes à essai pour compter les leucocytes;

solution d'acide acétique à 3%, à laquelle sont ajoutées quelques gouttes de violet de méthyle ou de bleu de méthylène;

chambre de comptage ;

microscope.

Le mélangeur pour leucocytes diffère de celui pour les érythrocytes en ce qu'il a une lumière capillaire plus large et un réservoir plus petit. Trois marques sont appliquées au mélangeur : 0,5, 1,0 et 11. Cela vous permet de diluer le sang 10 ou 20 fois (le plus souvent, il est dilué 20 fois).

Avancement de la recherche : lors du prélèvement de sang pour le comptage des leucocytes, les restes de sang sont d'abord retirés de la peau avec un coton-tige et, en serrant légèrement le doigt, une nouvelle goutte de sang est libérée. Lorsque vous travaillez avec des mélangeurs, le sang est aspiré jusqu'à la marque 0,5, puis dilué avec une solution à 3% d'acide acétique jusqu'à la marque 11. Agiter vigoureusement pendant 3 minutes, puis égoutter 1-2 gouttes et remplir la chambre de comptage. Lorsque vous travaillez avec des tubes à essai pour le comptage des leucocytes, versez 0,4 ml d'une solution d'acide acétique à 3% et libérez-y 0,02 ml de sang, mesuré avec une pipette d'un hémomètre Saly. Bien agiter les tubes à essai, puis abaisser la pipette dans le liquide et, après avoir recueilli le contenu, remplir la chambre de comptage. Comme il y a beaucoup moins de leucocytes que d'érythrocytes, afin d'obtenir un résultat fiable et précis, le calcul est effectué en 100 grands carrés (non marqués). Habituellement, il y a 1 à 2 leucocytes dans un grand carré. Le nombre de leucocytes dans 1 µl de sang est calculé de la même manière que le calcul du nombre d'érythrocytes à l'aide de la formule

X \u003d (A x 4000 x C) / B,

où X est le nombre de leucocytes dans 1 µl de sang ; A - le nombre de leucocytes comptés dans 1600 petits carrés ; B - le nombre de petits carrés comptés (1600); 4000 est la valeur, multipliant par laquelle nous obtenons le nombre de cellules dans 1 µl.

Interprétation des données reçues. Numération normale des globules blancs : 4,0 - 9,0 x 10 9 /l. Une diminution de leur nombre dans le sang est appelée leucopénie, une augmentation est appelée leucocytose.

Leucocytose peut être absolu (vrai) et relatif (redistributif).

Leucocytose absolue - observée dans les processus inflammatoires aigus, la nécrose tissulaire, les infections bactériennes aiguës (à l'exception de la fièvre typhoïde, la brucellose, la tularémie, etc.), les affections allergiques, les tumeurs malignes (avec destruction des tissus), blessures fermées hémorragies crâniennes et cérébrales, coma diabétique et urémique, choc, perte de sang aiguë, comme réaction primaire - avec maladie des rayons. Une augmentation significative du nombre de leucocytes se produit dans la leucémie.

Relatif (redistributif) est une conséquence de l'entrée de leucocytes dans la circulation sanguine à partir des organes qui lui servent de dépôt. Cela se produit après les repas (leucocytose alimentaire), les bains chauds et froids, les émotions fortes (leucocytose végétovasculaire), le travail musculaire intensif (leucocytose myogénique), etc.

Leucopénie. La leucopénie est considérée comme un indicateur d'inhibition de la capacité fonctionnelle de la moelle osseuse à la suite d'une exposition à des substances toxiques (arsenic, benzène, etc.), à certains médicaments (sulfamides, lévomycétine, butadione, immuran, cyclophosphamide, etc.), virus (grippe, hépatite virale, rougeole, etc.), microbes (fièvre typhoïde, brucellose, etc.), rayonnements ionisants, rayons X et hypersplénisme (augmentation de la fonction de la rate).

La leucocytose et la leucopénie sont rarement caractérisées par une augmentation (diminution) proportionnelle du nombre total de leucocytes de tous types (par exemple, leucocytose avec épaississement du sang); dans la plupart des cas, il y a une augmentation (diminution) du nombre d'un type de cellule, par conséquent, les termes "neutrophilie", "neutropénie", "lymphocytose", "lymphopénie", "éosinophilie", "éosinopénie", "monocytose" , "monocytopénie" sont utilisés , "basophilie".

Dans l'évaluation clinique des modifications du nombre de leucocytes grande importance est donné au pourcentage de formes individuelles de leucocytes, c'est-à-dire la formule leucocytaire.

La formule leucocytaire du sang d'une personne en bonne santé:

Quantité relative Quantité absolue

Basophiles……………………….0-1% 0-0.0650 x 10 9 /l

Éosinophiles……………………….0.5-5% 0.02-0.30 x 10 9 /l

Neutrophiles : - myélocytes…………0% absents

Métamyélocytes……0% absents

Coup ...... 1-6% 0,040-0,300 x 10 9 / l

Segmenté ... .47-72% 2.0-5.5 x 10 9 / l

Lymphocytes……………………….19-37% 1,2-3,0 x 10 9 / l

Monocytes………………………….3-11% 0.09-0.6 x 10 9 /l

Le décompte de la formule leucocytaire est effectué dans des frottis colorés de sang périphérique. Pour une interprétation correcte des résultats de l'étude de la formule leucocytaire, il est recommandé de compter en quantités absolues et non en quantités relatives. Les méthodes les plus courantes de coloration des frottis selon Romanovsky-Giemsa, selon Pappenheim. Sous immersion, au moins 200 cellules sont considérées, puis le pourcentage de types individuels de leucocytes est dérivé. L'analyse du leucogramme, en tenant compte d'autres paramètres sanguins et du tableau clinique, est une méthode d'examen précieuse, elle aide à établir un diagnostic et à déterminer le pronostic de la maladie.

Les principales causes de neutrophilie.

Infections bactériennes aiguës - localisées et généralisées.

Inflammation ou nécrose tissulaire.

Maladies myéloprolifératives.

Intoxication.

Effets médicinaux (corticostéroïdes).

Saignement aigu.

Les principales causes de neutropénie.

Infections - bactériennes (fièvre typhoïde, brucellose, tularémie, paratyphoïde) et virales (hépatite infectieuse, rougeole, grippe, rubéole et autres).

Effets myélotoxiques et suppression de la granulocytopoïèse ( rayonnement ionisant; agents chimiques - benzène, aniline, DDT; effets médicinaux - cytostatiques et immunosuppresseurs; vitamine B 12 - anémie par carence en folate, leucémie aleucémique aiguë, anémie aplasique).

L'impact des anticorps (formes immunitaires) - hypersensibilité aux médicaments, maladies auto-immunes (LED, polyarthrite rhumatoïde, leucémie lymphoïde chronique), manifestations iso-immunes (maladie hémolytique du nouveau-né).

Redistribution et dépôt dans les organes - états de choc, maladies avec splénomégalie et hypersplénisme.

Formes héréditaires (neutropénie chronique bénigne familiale).

Les principales causes de l'éosinophilie.

Maladies allergiques.

Lésions cutanées chroniques - psoriasis, pemphigus, eczéma.

Tumeurs (variantes éosinophiles de la leucémie).

Autres maladies - Endocardite fibroplastique de Leffler, scarlatine.

Dans la phase de convalescence des infections et des maladies inflammatoires (signe de bon pronostic).

Causes de l'éosinopénie (anéosinophilie).

Augmentation de l'activité des corticostéroïdes dans le corps.

La fièvre typhoïde.

Les principales causes de la basophilie :

Leucémie myéloïde chronique et érythrémie.

Les principales causes de monocytose.

Infections bactériennes subaiguës et chroniques.

Hémoblastoses - leucémie monocytaire, lymphogranulomatose, lymphomes.

Autres conditions - LED, sarcoïdose, polyarthrite rhumatoïde, monocytose infectieuse ; pendant la période de récupération des infections, à la sortie de l'agranulocytose, après splénectomie.

La diminution du nombre de monocytes est importante principalement pour évaluer le rapport lymphocytes-monocytaires dans la tuberculose pulmonaire.

Les principales causes de lymphocytose.

Infections - virales aiguës (mononucléose infectieuse, rougeole, rubéole, varicelle), bactériennes chroniques (tuberculose, syphilis, brucellose), protozoaires (toxoplasmose).

Hémoblastoses (leucémie lymphocytaire, lymphomes).

Autres maladies - hyperthyroïdie, maladie d'Addison, vitamine B 12 - anémie par carence folique, anémie hypo et aplasique.

Lymphocytopénie observé dans le LED, la lymphogranulomatose, la tuberculose généralisée des ganglions lymphatiques, au stade terminal de l'insuffisance rénale, la maladie aiguë des rayons, les états d'immunodéficience, la prise de glucocorticoïdes.

Une augmentation ou une diminution du nombre de certains types de leucocytes dans le sang peut être relative ou absolue. Si seul le pourcentage de l'un ou l'autre type de leucocytes change, il se produit alors une neutrophilie relative, une éosinopénie relative, etc. Une augmentation ou une diminution du contenu absolu de tout type de leucocytes, c'est-à-dire du nombre de ces cellules par unité de volume de sang, est appelée neutrophilie absolue, éosinopénie absolue, etc.

Le déplacement de la formule vers la gauche (une augmentation du nombre de jeunes formes de neutrophiles) est un signe d'inflammation ou de processus nécrotique dans le corps.

Un déplacement de la formule leucocytaire vers la droite est caractéristique du mal des rayons et de l'anémie par carence en vitamine B 12 - acide folique.

L'absence ou la diminution significative du nombre de tous les types de leucocytes granulaires - granulocytes (neutrophiles, éosinophiles, basophiles) est appelée agranulocytose. Selon le mécanisme de survenue, on distingue myélotoxique (exposition aux rayonnements ionisants, prise de cytostatiques) et immunitaire (haptène et agranulocytose auto-immune).