Metode pentru studiul leucocitelor din sânge. Leucocite (leucocite)

01.07.2020

Citeste si

Ce face Comitetul de Investigații al Federației Ruse: principalele sarcini și competențe

Ceea ce a făcut ca sistemul energetic al Uralilor să se cutremure astfel încât Belarusul a simțit-o

Candidatul republican Donald Trump a câștigat alegerile prezidențiale din SUA

Ce alarmă de pornire automată este mai bună - comparație între modele și producători

Principiu. Numărarea leucocitelor în timpul microscopiei într-un anumit număr de pătrate ale camerei de numărare și calcularea numărului lor în 1 litru de sânge, ținând cont de diluția sângelui și de volumul camerei de numărare.

Reactiv: soluție 3-5% de acid acetic, colorată pentru a colora nucleele leucocitelor cu câteva picături de soluție de albastru de metilen. Soluția are o culoare albastră, poate fi păstrată o lungă perioadă de timp.

Progresul definirii. Se toarnă 0,4 ml de soluție de acid acetic într-o eprubetă uscată. De la un deget se prelevează 0,02 ml de sânge (se poate folosi sânge venos stabilizat cu un anticoagulant). Ștergeți vârful pipetei, apoi suflați sângele din acesta până la fundul eprubetei, amestecați prin colectarea și suflarea în mod repetat a amestecului de sânge și reactiv (pipettare). Etichetați tubul și lăsați-l până la numărare. Se recomandă păstrarea unui amestec de sânge cu o soluție de acid acetic timp de cel mult 2-4 ore.

Sângele diluat într-o eprubetă cu acid acetic este bine amestecat și camera de numărare este umplută cu acesta. Camera umplută este lăsată în poziție orizontală timp de 1 min pentru sedimentarea leucocitelor. Leucocitele sunt numărate în 100 de pătrate mari, ceea ce corespunde cu 1600 de pătrate mici, fără a modifica poziția orizontală a camerei.

Pentru o mai mare acuratețe, leucocitele sunt numărate pe întreaga grilă în pătrate mari, nu împărțite în pătrate mici și dungi, începând din colțul din stânga sus al grilei. Pentru un contrast mai bun, câmpul vizual este întunecat prin coborârea condensatorului și închiderea diafragmei. Celulele situate în interiorul pătratului și situate pe oricare două linii sunt numărate pentru a nu număra aceeași celulă de două ori.

Calcularea numărului de leucocite se efectuează după formula:

unde X este numărul de leucocite din 1 pl de sânge; a - numărul de leucocite în 100 de pătrate mari; 20 - diluarea sângelui; 100 - numărul de pătrate mari; 250 este factorul de conversie per 1 µl, deoarece volumul unui pătrat mare este de 1/250 µl (latura pătratului este de 1/5 mm, înălțimea este de 1/10 mm).

În practică, pentru a calcula numărul de leucocite din 1 μl de sânge, numărul lor în 100 de pătrate mari este înmulțit cu 50, iar în 1 litru, valoarea rezultată este înmulțită cu 106.

Notă. La numărarea leucocitelor, o eroare este inevitabilă în 6-8% din cazuri.

Cauzele erorilor.

Cu un număr mare de normocite în sângele periferic, acestea sunt numărate ca leucocite (atât leucocitele, cât și normocitele sunt celule nucleate). Pentru a determina corect numărul de leucocite, numărul de normocite trebuie scăzut din numărul total de celule sanguine nucleate.
Erorile rămase sunt similare cu cele care apar la numărarea numărului de eritrocite din camera de numărare.

Numărul de leucocite din sânge depinde atât de rata de formare a acestora, cât și de mobilizarea lor din măduva osoasă, precum și de utilizarea și migrarea lor în țesuturi (în leziuni), captate de plămâni și splină. Aceste procese, la rândul lor, sunt influențate de o serie de factori fiziologici și, prin urmare, numărul de leucocite din sângele unei persoane sănătoase este supus fluctuațiilor: crește spre sfârșitul zilei, cu activitate fizica, stres emoțional, aport de proteine, o schimbare bruscă a temperaturii ambientale.

Cuantificarea leucocitelor

Leucocitele sunt numărate folosind o cameră Goryaev și folosind contoare automate.

Numărarea leucocitelor folosind camera lui Goryaev

Cu metoda eprubei de prelevare a sângelui pentru numărarea leucocitelor:

Într-o eprubetă se toarnă 0,4 ml dintr-o soluție de acid acetic 3-5%, colorată cu albastru de metilen. Cu o pipetă capilară, se prelevează 20 μl de sânge dintr-o picătură proaspătă (diluție de 20 de ori), se sufla cu grijă într-o eprubetă cu un reactiv și se clătește pipeta. Amestecul este bine amestecat;
o lamelă curată și uscată este frecată de cameră, astfel încât să se formeze inele irizate în punctul de contact;
sângele diluat în eprubetă se amestecă bine. Se ia o picătură de sânge cu capătul unei baghete rotunde de sticlă și se aduce la marginea sticlei șlefuite a camerei;
dupa umplerea camerei se lasa 1 min in repaus pentru sedimentarea leucocitelor;
numărarea leucocitelor la mărire mică (lentila ×8 sau ×9, ocular ×10 sau ×15) cu un câmp vizual întunecat (cu condensatorul coborât sau cu diafragma îngustată);
pentru a obține rezultate satisfăcătoare, leucocitele sunt numărate în 100 de pătrate mari.

Cunoscând volumul pătratului mare și gradul de diluare a sângelui, găsiți numărul de leucocite în 1 μl și 1 litru de sânge. Latura pătratului mare este de 1/5 mm, aria este de 1/25 mm2, volumul spațiului de deasupra acestui pătrat este de 1/250 mm3.

Formula pentru numărarea leucocitelor:

unde B este numărul de leucocite din 100 de pătrate mari;
P - gradul de diluare (20).

Conținutul cantitativ al leucocitelor

Normă: 4,0–9,0 × 10 9 /L

Se numește o creștere a numărului de leucocite peste 9,0 × 10 9 / l
leucocitoză, o scădere a numărului lor sub 4,0 × 10 9 /l - leucopenie. Cu toate acestea, chiar și 3,5 × 10 9 în 1 litru de leucocite pentru un număr de indivizi poate fi norma. Potrivit literaturii de specialitate, astfel de persoane au o rezistență imună crescută și sunt mai puțin probabil să se îmbolnăvească, ceea ce, aparent, se explică prin necesitatea implementării reacțiilor imune de a avea o rezervă de leucocite în țesuturi, unde există 50-60 de leucocite. ori mai multe dintre ele decât în sânge. Evident, la indivizii sănătoși, cu un conținut scăzut de leucocite în sângele periferic, rezervele lor în țesuturi cresc în mod corespunzător. Acest fenomen se explică printr-o natură ereditar-familială sau o creștere a influenței sistemului nervos parasimpatic.

Leucopenia poate fi funcțională și organică.
Leucopenia funcțională este asociată cu dereglarea hematopoiezei și se observă:

cu unele infectii bacteriene si virale (febra tifoida, gripa, variola, rubeola, boala Botkin, rujeola);
sub acţiune medicamente(sulfonamide, analgezice, anticonvulsivante, antitiroidiene, citostatice și alte medicamente);
cu munca musculară, introducerea unei proteine străine, influențe nervoase și ale temperaturii, înfometare, stări hipotonice;
leucocitopenia falsă poate fi asociată cu agregarea leucocitelor în timpul depozitării pe termen lung a sângelui la temperatura camerei(mai mult de 4 ore).

Leucopenia organică, rezultată din aplazia măduvei osoase și înlocuirea acesteia cu țesut adipos, apare atunci când:

anemie aplastica;
agranulocitoză;
forma leucopenică a leucemiei;
unele forme de limfogranulomatoză;
radiații ionizante;
hipersplenism (primar și secundar);
colagenoze.

Leucocitoza

Leucocitoza este o reacție a sistemului hematopoietic la expunerea la
factori exogeni și endogeni. Există leucocitoză fiziologică și patologică.

Leucocitoza fiziologică este:

digestiv - după masă, în special bogat în proteine; numărul de leucocite nu depășește 10,0–12,0 × 10 9 /l și revine la normal după 3–4 ore;
cu stres emoțional (eliberare de adrenalină), efort fizic intens, răcire, expunere excesivă la soare ( arsuri solare), introducerea unui număr de hormoni (catecolamine, glucocorticosteroizi etc.), în a doua jumătate a sarcinii, în timpul menstruației și se datorează unei distribuții neuniforme a leucocitelor în sânge.

Leucocitoza patologică este împărțită în absolută și relativă.

Leucocitoză absolută- o creștere a numărului de leucocite din sânge până la câteva sute de mii (100,0–600,0 × 10 9 /l și mai mult).

Cel mai des observat în leucemie: în leucemia cronică - în 98-100% din cazuri, cu leucemie acută- în 50-60%. Schimbarea raportului de celule leucocitare în măduva osoasă punctată și în sânge servește drept bază pentru diagnosticul leucemiei.

Leucocitoză relativă observat:

în procesele inflamatorii și infecțioase acute, cu excepția febrei tifoide, a gripei, a variolei, a rubeolei, a bolii Botkin, a rujeolei. Cea mai mare leucocitoză (până la 70,0–80,0 × 10 9 /l) se observă cu sepsis;
sub influența substanțelor toxice (otrăvuri de insecte, endotoxine), radiații ionizante (imediat după expunere);
ca urmare a acțiunii corticosteroizilor, adrenalinei, histaminei, acetilcolinei, preparatelor digitalice;
cu degradarea țesuturilor (necroză), infarct miocardic, tromboză a arterelor periferice cu dezvoltarea de gangrenă, arsuri, pleurezie exudativă, pericardită, uremie, comă hepatică;
pierderi semnificative de sânge în răni, sângerări interne, ginecologice și alte sângerări.

O creștere a numărului de leucocite cu boli infecțioaseîn cele mai multe cazuri, este însoțită de o deplasare a formulei leucocitelor spre stânga

Factorii care afectează corectitudinea studiului leucocitelor

crioglobulinemie

Paraproteinemie

Normoblastele

Agregatele trombocite

Eritrocite nelizate

Depozitarea pe termen lung a sângelui la temperatura camerei

Vârsta numărului de leucocite

1 zi 11.6 - 22.0

1 săptămână 8.1.- 14.3

1 lună 7.6 – 12.4

1 an 6,8 - 11,0

Adulti 4.0 – 9.0

Metode pentru determinarea numărului de leucocite din sânge.

Numărarea numărului de leucocite din camera de numărare

Numărul de leucocite în analizoarele de hematologie

Determinarea numărului de leucocite din camera de numărare.

Numărarea leucocitelor la microscop se efectuează după lizarea eritrocitelor în 100 de pătrate mari ale grilei de numărare și recalculată pentru 1 litru de sânge, pe baza volumului pătratelor și a diluției sângelui. Numărarea leucocitelor trebuie făcută în 2-4 ore după administrarea sângelui.

Dacă există celule roșii nucleate în sângele periferic, acestea nu sunt lizate și numărate împreună cu leucocitele. În acest caz, pentru a determina numărul real de leucocite, numărul de celule din rândul roșu este scăzut din numărul total de celule numărate.

De exemplu: Numărul total de leucocite la numărarea în cameră (sau pe analizor) este de 45x109/l. La calcularea formulei leucocitelor, s-a constatat că există 50 de eritroblaste (normoblaste) la 100 de leucocite.

Calculăm numărul real de leucocite din sânge:

150 celule - 45 x 109/l

100 de celule (leucocite) - X

X \u003d 100 * 45 * 10 / l / 150 \u003d 30 * 10 / l

Astfel, numărul real de leucocite din sânge este de 30 x109 / l.

Principalele surse de eroare la numărarea leucocitelor în cameră sunt:

Raport incorect dintre volumele de sânge și acid acetic prelevate într-o eprubetă.

Soluție de acid acetic preparată incorect (la o concentrație mai mare de 5%, unele dintre leucocite pot fi lizate, ceea ce va duce la o subestimare a rezultatului).

Expunerea prelungită a probei la temperaturi peste 28°C, ceea ce poate accelera liza leucocitelor din probă și poate duce la o subestimare a rezultatului.

Umplerea incorectă a camerei Goryaev. Ca și în cazul numărării RBC, camera trebuie lăsată timp de 1 minut pentru ca celulele să se stabilească.

Spălată insuficient de bine după determinarea anterioară, camera lui Goryaev. Celulele albe rămase în cameră pot supraestima rezultatele analizei.

Metode de numărare a trombocitelor

În camera de numărare

Frotiuri de sânge

Analizor hematologic

Fiecare grup de metode are avantaje și dezavantaje.

Numărul de trombocite din cameră este destul de precis, nu necesită calculul numărului de globule roșii. Pe de altă parte, această metodă este mai laborioasă, deoarece trombocitele în forma lor nativă sunt elemente mici și slab contrastate. Dezavantajul metodei este numărarea trombocitelor în următoarele ore după administrarea sângelui.

Determinarea numărului de trombocite din frotiurile de sânge este semnificativ inferioară ca precizie față de metoda camerei sau contoare automate. Erorile de numărare în frotiurile de sânge se pot datora calității proaste a frotiului și distribuției neuniforme asociate a trombocitelor, determinării inexacte a numărului de globule roșii. Un inconvenient semnificativ al metodei este necesitatea numărării simultane a trombocitelor și eritrocitelor din sânge. Avantajul său este capacitatea de a studia trombocitele în orice moment, indiferent de momentul prelevării sângelui.

Metoda de determinare a trombocitelor cu ajutorul unui analizor hematologic vă permite să determinați cu exactitate numărul de trombocite, volumul mediu și distribuția lor în volum.

Dendrit.ru

Numărarea leucocitelor într-o cameră de numărare

Calcularea numărului de leucocite se efectuează după formula:

În practică, pentru a calcula numărul de leucocite din 1 μl de sânge, numărul lor în 100 de pătrate mari este înmulțit cu 50, iar în 1 litru, valoarea rezultată este înmulțită cu 106.

Notă. La numărarea leucocitelor, o eroare este inevitabilă în 6-8% din cazuri.

Cauzele erorilor.

Cu un număr mare de normocite în sângele periferic, acestea sunt numărate ca leucocite (atât leucocitele, cât și normocitele sunt celule nucleate). Pentru a determina corect numărul de leucocite, numărul de normocite trebuie scăzut din numărul total de celule sanguine nucleate.
Erorile rămase sunt similare cu cele care apar la numărarea numărului de eritrocite din camera de numărare.

Vezi si:

Numărarea leucocitelor într-un analizor hematologic (contor automat)

onlab.info

Determinarea numărului de leucocite

Acasă / Carte de referință pentru diagnosticul clinic de laborator / Analize de sânge / Leucocite / Determinarea numărului de leucocite

Metoda de numărare a camerei

Prelevarea și diluarea sângelui produs prin metoda eprubetei. Într-o eprubetă se introduc 0,4 ml de lichid de diluare și 0,02 ml de sânge capilar (de preferință Vidalevsky). Diluția rezultată este practic considerată egală cu 1: 20. Ca lichid de diluare, se folosește de obicei o soluție 3-5% de acid acetic colorat cu albastru de metilen (acidul acetic lizează eritrocitele, albastrul de metilen colorează nucleele leucocitelor). Înainte de a umple camera Goryaev, eprubeta cu sânge diluat este bine agitată. Camera este umplută în același mod ca și pentru numărarea globulelor roșii.

Există mult mai puține leucocite decât eritrocite (1-2 pe pătrat mare), prin urmare, pentru acuratețe, numărarea se face în 100 de pătrate mari (nemarcate).

Calcul: leucocitele au fost numărate în 100 pătrate mari (1600 mici). Reținând că volumul unui pătrat mic este de 1/4000 mm3, iar sângele este diluat de 20 de ori, se calculează numărul de leucocite din 1 μl de sânge: 4000 * 20 și se împarte la 1600 = a * 1/2. În practică, pentru a obține conținutul real de leucocite în 1 μl de sânge, este suficient să împărțiți numărul obținut în timpul calculului la jumătate și să atribuiți 2 zerouri. Eroarea medie a metodei este de ± 7%.

Mai precisă (eroare 2-3%) și perfectă este numărarea leucocitelor folosind dispozitive electronice. Numărarea leucocitelor în contoarele de particule se efectuează după același principiu ca și pentru eritrocite. Sângele este preliminar diluat și amestecat cu ceva reactiv de liză a eritrocitelor. În autoanalizatorul Technikon se folosește ca atare o soluție de acid acetic, în dispozitivele Coulter și Celloscope, saponină sau sapoglobină, care se adaugă diluate (1: 500, 1: 700) într-o soluție izotonă de clorură de sodiu (6 picături la 20 ml). reproducere).

www.medkurs.ru

Numărul de leucocite și formula de leucocite.

Pentru a număra leucocite, sângele este diluat în mixere sau în eprubete. În acest scop, se folosește o soluție de acid acetic 3-5% (pentru distrugerea eritrocitelor), colorată cu un fel de colorant de anilină (pentru colorarea nucleelor leucocitelor). Grila de numărare se umple în același mod ca și pentru numărarea eritrocitelor. Leucocitele sunt numărate în 100 de pătrate mari. În grila lui Goryaev, este convenabil să le numărați în pătrate nelimitate (sunt 100 dintre ele pe grilă). Având în vedere diluția sângelui și volumul de lichid deasupra pătratelor, se calculează un multiplicator constant. Când este diluat de 20 de ori, este 50.

Când lucrați cu eprubete, se toarnă mai întâi 0,38 ml de lichid în ele și se eliberează 0,02 ml de sânge în el. Pentru numărarea în tuburi de numărare automată, eritrocitele sunt hemolizate cu saponină. Conținutul normal de leucocite este de 4,3 109-11,3 109 / l, sau 4300-11 300 în 1 μl de sânge.

Formula leucocitară este numărată în frotiuri colorate.

Un frotiu bun îndeplinește următoarele cerințe: este subțire, iar elementele modelate se află într-un singur strat; în acest caz, frotiu este galben și translucid. Un frotiu bun este uniform și celulele nu sunt deteriorate prin frotiu. Pentru ca sângele să se așeze într-un strat uniform pe sticlă, acesta se degresează prin arderea lui peste o flacără. arzător de gaz sau păstrate într-un amestec de alcool și eter. Capătul paharului este atins cu o picătură mică de sânge proaspăt eliberată și fără întârziere se unge pe pahar. Înainte de colorare, frotiul se fixează prin scufundare în metanol timp de 3 minute, în alcool etilic sau amestecul acestuia cu eter timp de 30 de minute. Există, de asemenea, o serie de alte elemente de fixare. Uscată după fixare, frotiul este umplut cu colorant.

Pentru a distinge celulele sanguine (determinarea formulei leucocitelor), acestea recurg la colorarea diferențială. Cea mai utilizată este colorația Romanovsky-Giemsa. Acest colorant este un amestec de vopsele ușor acide (eozină) și ușor alcaline (azur II). Celulele și părțile lor, în funcție de reacția mediului în ele, percep una sau alta componentă a colorantului: substanțele acide (bazofile) sunt colorate cu azur în albastru, alcaline (oxifile) sunt colorate cu eozină în roșu; neutre iau ambele culori și devin violet.

Formula leucocitară se numește procent forme individuale de leucocite sanguine.

NB! Pentru un calcul destul de precis, trebuie să vă uitați la cel puțin 200 de leucocite.

Numărarea se face cu un sistem de imersie. Datorită faptului că celulele sunt distribuite neuniform în frotiu (cele mai mari merg la margini), este important să se respecte o astfel de ordine de mișcare de-a lungul frotiului, în care marginile și mijlocul acestuia ar fi la fel de vizibile. Se folosește una dintre cele două metode de mișcare: conform uneia dintre ele, cursa este mutată de la marginea de sus în jos, se deplasează 2-3 câmpuri vizuale de-a lungul marginii, apoi se merge în direcția opusă marginii de sus etc. În a doua metodă, se deplasează de la margine cu 5 -6 câmpuri la mijlocul cursei, apoi același număr în lateral, apoi înapoi la margine, mută câteva câmpuri în lateral și repetă din nou mișcarea până când Se numără 50 de celule. 4 astfel de zone sunt vizualizate la 4 colțuri ale frotiului. După numărarea a 200 de celule, numărul se împarte la jumătate și se determină numărul fiecărui tip de leucocite.

Leucocitele sunt elemente ale sângelui care răspund rapid la diverse influente externeși schimbări în interiorul corpului. Determinarea numărului total de leucocite poate fi de mare valoare diagnostică, deoarece relevă starea organelor hematopoietice sau răspunsul acestora la efectele nocive. O creștere a numărului de leucocite - leucocitoza - este rezultatul activării leucopoiezei, o scădere a numărului lor - leucopenia - poate depinde de inhibarea organelor hematopoietice, epuizarea acestora, creșterea degradarii leucocitelor sub acțiunea anticorpilor antileucocitari 1. Neutrofile. Cel mai variabil grup de leucocite sunt neutrofilele, al căror număr crește odată cu multe infecții, intoxicații și degradarea țesuturilor.

Caracteristica neutropoezei active este nu numai o creștere a numărului total de neutrofile din sânge, ci și apariția formelor imature în acesta: numărul de celule înjunghiate crește, apar neutrofile tinere, uneori chiar mielocite. Această „întinerire” a compoziției neutrofilelor se numește deplasarea formulei leucocitelor spre stânga. Rolul protector al neutrofilelor este determinat de funcția lor fagocitară, acțiunea bactericidă și eliberarea de enzime proteolitice care favorizează resorbția țesuturilor necrotice și vindecarea rănilor.

Cel mai adesea, o schimbare regenerativă apare în prezența oricărui proces inflamator sau focar de necroză. O deplasare foarte bruscă spre stânga către promielocite și chiar mieloblaste cu leucocitoză semnificativă se numește reacție leucemoidă. O scădere a numărului de neutrofile - neutropenie absolută - apare atunci când măduva osoasă este suprimată de efectele toxinelor anumitor microorganisme (agenți cauzatori ai febrei tifoide, bruceloză etc.) și viruși, radiații ionizante și o serie de medicamente.

2. Limfocite. Limfocitoza se observă în perioada de recuperare a bolilor infecțioase acute, cu mononucleoză infecțioasă, limfocitoză infecțioasă, limfocitoză, rubeolă, bruceloză, tirotoxicoză.

Limfopenia absolută apare cu boala de radiații, leziuni sistemice ale aparatului limfatic: limfogranulomatoză, limfosarcom.

3. Eozinofile. Se găsesc în sânge într-o cantitate relativ mică (conținută în principal în țesuturi), dar numărul lor crește, uneori semnificativ, cu procese alergice (boală serului, astm bronșic), invazii helmintice și dermatoze pruriginoase.

O scădere a numărului de eozinofile - eozinopenie - până la dispariția lor completă se observă în sepsis, forme severe tuberculoză, tifos, intoxicație severă.

4. Bazofile. Sunt purtători ai mediatorilor importanți ai metabolismului tisular („echivalenții” sanguini ai mastocitelor). Odată cu sensibilizarea organismului, numărul lor crește, odată cu introducerea repetată a alergenului, acesta scade brusc ca urmare a degradarii lor.

5. Monocite. O creștere a numărului de monocite - monocitoza - este un indicator al dezvoltării proceselor imune. Monocitele sunt recunoscute ca analogi ai macrofagelor tisulare. Monocitul se găsește într-o serie de boli cronice (croniosepsis, tuberculoză, sifilis). Monocitopenia se observă uneori în formele septice severe, hipertoxice de febră tifoidă.

Agranulocite. Trăsătură distinctivă agranulocitele sunt nucleu nesegmentat și citoplasmă bazofilă (albastru).

Limfocitul este cel mai mic globul alb din sânge. Miezul este rotund, oval sau în formă de fasole; ocupa cea mai mare parte a celulei, intens colorat. Citoplasma majorității limfocitelor înconjoară nucleul cu o margine îngustă, este colorată în albastru deschis și devine limpede spre nucleu.

Monocitul este cea mai mare dintre celulele sanguine. Un nucleu mare de formă neregulată și culoare relativ deschisă. Citoplasma este gri-albastru, de culoare fumurie, nu se limpezește până la nucleu

Pe lângă aceste celule, celulele plasmatice sunt rare în sângele normal, iar în boli, celulele plasmatice pot fi adesea găsite. Ele se disting printr-un miez dens situat excentric, adesea cu o structură în formă de roată. Numărul acestor celule crește în unele boli infecțioase, sepsis al plăgii, mielom multiplu.

La calcularea formulei leucocitelor, se acordă atenție nu numai modificărilor cantitative ale acesteia, ci și modificărilor calitative ale elementelor modelate. Anterior, au fost observate modificări degenerative ale leucocitelor. La intoxicație severă, granularitatea neutrofilelor devine abundentă, mare, intens colorată și se numește toxică (sau toxogenă). Uneori, pete neclare se găsesc în frotiurile de sânge, colorate ca substanța nucleară a leucocitelor. Acestea sunt așa-numitele umbre Botkin-Gumprecht - rămășițele cromatinei nucleare, indicând o fragilitate crescută a leucocitelor, ducând la descompunerea lor - leucocitoliza

99. Metodologia de determinare a grupei sanguine, conceptul de factor Rh.

1. Determinarea grupei sanguine conform serurilor standard:

Următoarele echipamente sunt necesare:

o două seturi de ser standard de hemaglutinare I (0), II (A), III (B) din grupuri de două serii diferite și o fiolă de ser IV (AB)

o o sticlă de soluție izotonică de clorură de sodiu cu o pipetă

o farfurie curată și uscată

o lame de sticlă

o ace sterile în formă de suliță pentru înțeparea pulpei degetului

o bile sterile de tifon,

Serurile standard pentru determinarea grupei sanguine conform sistemului ABO sunt produse cu un anumit cod de culoare: I (0) - incolor, II (A) - albastru, III (B) - roșu, IV (AB) - galben. Serul se păstrează la o temperatură de 4-10 °C. Serul trebuie să fie ușor și transparent. Prezența fulgilor, a sedimentelor, a turbidității sunt semne ale inadecvării serului. Primele semne de aglutinare ar trebui să apară nu mai târziu de 30 de secunde.

Placa este împărțită în 4 pătrate cu un creion colorat și pătratele I (0), II (A), III (B) sunt marcate în sensul acelor de ceasornic. O picătură mare de ser din două serii de grupe I (0), II (A), W (B) este aplicată pe pătratul corespunzător al plăcii cu o pipetă. Padul degetului este tratat cu alcool și pielea este perforată cu un ac. Prima picătură de sânge este îndepărtată cu o minge de tifon, picăturile ulterioare sunt introduse în picături de ser în diferite colțuri ale lamei de sticlă și amestecate bine. O picătură de sânge introdusă trebuie să fie de 5-10 ori mai mică decât o picătură de ser. Apoi, scuturând farfuria, amestecați bine sângele cu serul. Rezultatele preliminare se evaluează după 3 minute, după care se adaugă o picătură de soluție izotonică de clorură de sodiu, se amestecă din nou prin agitarea plăcii și după 5 minute se efectuează evaluarea finală a reacției de aglutinare.

Cu o reacție pozitivă de izohemaglutinare, fulgii și boabele din eritrocitele lipite împreună nu se dispersează atunci când se adaugă și se amestecă o soluție izotonică de clorură de sodiu.

Cu o reacție negativă, picăturile de ser de pe o farfurie sunt transparente, uniform Culoare roz, nu contin fulgi si boabe.

Sunt posibile următoarele 4 combinații de reacții de aglutinare cu seruri standard ale grupelor I (0), II (A), III (B).

v Toate cele 3 seruri din ambele serii nu s-au aglutinat. Sânge testat -

v Reacția de izohemaglutinare este negativă cu serurile P (A) din ambele serii și pozitivă cu serurile I (0) și III (B). Sânge investigat -

II (A) grupe.

v Reacția de izohemaglutinare este negativă cu ser din grupele III (B) din ambele serii și pozitivă cu ser din grupele I (0) și II (A). Sânge testat -

III (B) grupe.

v Grupările serice I (0), II (A), III (B) dau o reacție pozitivă în ambele serii. Sângele aparține grupei IV (AB). Dar înainte de a da o astfel de concluzie, este necesar să se efectueze o reacție de izohemaglutinare cu ser standard din grupa IV (AB) conform aceleiași metode. Reacția negativă de izohemaglutinare face posibilă atribuirea în final a sângelui studiat grupului IV (AB).

2. Conceptul de factor Rh.

În eritrocite, a fost găsit un alt antigen (aglutinogen), care a fost numit factor Rh (Rh). Toți oamenii sunt împărțiți în persoane cu sânge Rh pozitiv (Rh+) și Rh negativ (Rh). S-a stabilit că 85% dintre oamenii din eritrocite conțin factorul Rh, adică sângele lor este Rh pozitiv, iar 15% nu îl conțin, adică sângele acestor persoane este Rh negativ. Nu există aglutinine anti-Rh (anticorpi gata preparate) în sânge împotriva factorului Rh (antigenul Rh). Astfel de anticorpi apar în serul sanguin numai ca urmare a imunizării unei persoane cu sânge Rh negativ cu globule roșii Rh pozitive. O astfel de imunizare are loc ca urmare a transfuziilor repetate de sânge Rh pozitiv la un primitor Rh negativ sau în timpul sarcinii unei femei cu sânge Rh negativ la un făt Rh pozitiv. Persoanele imunizate astfel devin sensibilizate: atunci când sunt transfuzate cu sânge Rh pozitiv, se dezvoltă o complicație severă - șocul hemotransfuzional.

⇐ Anterior26272829303132333435Următorul ⇒

Leucocite. Norma este (4–9) x109 / l de sânge. Numărul acestora depinde de viteza de formare în ganglionii limfatici, splina și măduva osoasă, mobilizarea din măduva osoasă, utilizarea și migrarea în țesuturi, captarea de către plămâni și splina și factori fiziologici. Funcția principală a granulocitelor (în primul rând neutrofilele) este fagocitară - captarea și digestia materialului străin cu ajutorul enzimelor hidrolitice. La evaluarea numărului de leucocite din clinică, se utilizează formula leucocitelor - procentul formelor individuale de leucocite. În mod normal, această valoare este constantă.

Formula leucocitară

O creștere a numărului de leucocite cu până la câteva zeci de mii indică leucocitozași se observă în bolile inflamatorii și infecțioase acute, însoțite de o deplasare a formulei leucocitelor spre stânga. O creștere a numărului de leucocite la câteva sute de mii indică leucemie. În bolile infecțioase severe, morfologia neutrofilelor se modifică: se notează degranulare, vacuolizare etc.. O scădere a numărului de leucocite sub 4000 indică leucopenie cel mai adesea agranulocitoză. O scădere a numărului de celule albe din sânge poate fi asociată cu utilizarea diferitelor medicamente, creșterea fondului radioactiv, urbanizarea etc. Neutropenie se manifestă sub influența citostaticelor, cu lupus, artrită reumatoidă, malarie, salmoneloză, bruceloză, ca sindrom specific - cu SIDA și radiații.

Leucocitele sunt neutrofile. Conținutul din sânge - 50-75% (2,2-4,2) x109 / l. Diametru –10–12 µm.

Nucleul este compact, este format din 3–4 segmente legate prin punți; citoplasmă cu granularitate abundentă. În infecții și inflamații, neutrofilele îndeplinesc funcția de macrofage - celule capabile de fagocitoză.

Leucocite eozinofile. Norma este de 1–5% din leucocite, (0,1–0,3) x109 / l. Celulele sunt mai mari decât neutrofilele, cu diametrul de până la 12 microni. Nucleul este format de obicei din 2-3 segmente. Citoplasma este ușor bazofilă, conține reacții mari, strălucitoare colorate cu eozină, dând oxidază pozitivă, peroxidază, citocrom oxidază, succinat dehidrogenază și reacții de fosfatază acidă. Sunt capabili de fagocitoză, participă la detoxifierea produselor proteice și la reacțiile alergice ale organismului.Eozinofilia este caracteristică helmintiazelor, este posibilă în stadiul de recuperare a bolilor infecțioase.

Leucocitele sunt bazofile. Conținutul din sânge este de 0-1% (până la 0,06x109 / l). Diametru de la 8 la 12 microni. Nucleul este larg și de formă neregulată. Citoplasma conține o granularitate mare, colorată metacromatic în tonuri violet-negru. Participați la reacții alergice (tipuri imediate și întârziate): produceți histamina și heparină (un grup de heparinocite).

Monocite/macrofage. Norma este de 2–10% din leucocite, (0,2–0,55) x109 / l. Dimensiuni de la 12 la 20 microni. Nucleul este mare, liber, cu o distribuție neuniformă a cromatinei. Ele circulă în sânge pentru o perioadă scurtă de timp, trec în țesuturi, transformându-se în macrofage și sunt capabile de mișcare amiboid. Celulele conducătoare ale răspunsului imun al organismului. Funcția principală este endocitoza. Ele sunt veriga centrală a sistemului fagocitar mononuclear. Ele îndeplinesc o serie de funcții dependente de citokine: hematopoietice, imunostimulatoare, proinflamatorii, imunosupresoare și antiinflamatorii.

Produse de secreție de macrofage:

Proteaze: activator de plasminogen, colagenază, elastază, angiotensin convertază.

Mediatori ai inflamației și imunomodulării: interleukină-1 (IL-1), factor de necroză tumorală α, interferon γ, lizozimă, factor de activare a neutrofilelor, componente ale complementului C1, C2, C3, C5, properdină, factori B, D, IL-3, IL-6, IL- 8, IL-10, IL-12, IL-15.

Factori de creștere: CSF-GM, CSF-G, CSF-M, factor de creștere a fibroblastelor, factor de creștere transformant.

Factorul de coagulare și inhibitori de fibrinoliză: V, VII, IX, X, inhibitori de plasminogen, inhibitori de plasmină.

Adezivi: fibronectină, trombospondină, proteoglicani.

Metoda de numărare a camerei

Există mult mai puține leucocite decât eritrocite (1-2 pe pătrat mare), prin urmare, pentru acuratețe, numărarea se face în 100 de pătrate mari (nemarcate).

Calcul:în 100 pătrate mari (1600 mici) s-a numărat un leucocite. Reținând că volumul unui pătrat mic este de 1/4000 mm 3, iar sângele este diluat de 20 de ori, se calculează numărul de leucocite din 1 μl de sânge: 4000 * 20 și se împarte la 1600 = a * 1/2. În practică, pentru a obține conținutul real de leucocite în 1 μl de sânge, este suficient să împărțiți numărul obținut în timpul calculului la jumătate și să atribuiți 2 zerouri. Eroarea medie a metodei este de ± 7%.

12. Funcţiile granulocitelor. Rolul limfocitelor T și B în crearea unor mecanisme specifice de imunitate:

celulele principale sistem imunitar sunt limfocitele T și B care circulă în sânge și în sistemul limfatic, deplasându-se constant dintr-o parte a sistemului imunitar în alta, au capacitatea de a pătrunde în țesuturi pentru a îndeplini funcții de protecție (Fig. 1).

Pe lângă limfocitele T și B, reacțiile de protecție ale imunității specifice implică celule fagocitare (granulocite, monocite, macrofage), „natural killer”, mastocite, celule endoteliale și epiteliale, care joacă rolul de auxiliare, interacționând cu T- și limfocitele B.

Răspunsul imun constă într-o serie complexă de interacțiuni celulare activate prin intrarea în organism a materialului antigenic străin. În primul rând, macrofagul captează organismul purtător de antigen. Apoi macrofagul scindează o parte din antigen (peptidă) și o aduce la suprafață, ca și cum ar fi prezentat-o celulelor imune. Activarea unui limfocite de către antigen duce la proliferarea și transformarea limfocitelor.

Limfocite sunt singurele celule din organism care pot recunoaște în mod specific antigenele de sine și străine și răspund prin activare la contactul cu un antigen specific. Cu morfologie foarte asemănătoare, limfocitele sunt împărțite în două populații care au funcții diferite și produc proteine diferite.

Una dintre populații a fost numită limfocitele B. La om, limfocitele B se maturizează în măduva osoasă. Limfocitele B recunosc antigenele prin receptori specifici de natura imunoglobulinei, care, pe masura ce limfocitele B se maturizeaza, apar pe membranele lor. Limfocitele B sunt capabile să recunoască și să lege proteinele, polizaharidele și antigenele solubile în lipoproteine.Funcția principală a limfocitelor B este recunoașterea specifică a unui antigen. Recunoașterea antigenului duce la activarea, proliferarea și transformarea limfocitelor B în plasmocite - producători de anticorpi specifici - imunoglobuline. Astfel format răspunsul imun umoral. Cel mai adesea, limfocitele B au nevoie de ajutorul limfocitelor T sub forma producerii de citokine activatoare pentru a dezvolta un răspuns imun umoral.

O altă populație a fost numită limfocite T în legătură cu diferențierea precursorilor lor în timus. Limfocitele T îndeplinesc cea mai importantă funcție de recunoaștere specifică și de legare a antigenului. Limfocitele T activate de antigeni proliferează și se transformă în diferite subpopulații, care participă în continuare la toate formele de răspuns imun. Un limfocit T activat produce și secretă, de asemenea, citokine care intensifică procesele de creștere a numărului de limfocite T în sine, limfocite B și macrofage.

Dintre limfocitele T mature se disting două subpopulații principale: T-helpers (CD4+) și T-killers - limfocitele T citotoxice (CD8+). Marcarea „CD” este o caracteristică a „fenotipului celulei de suprafață” - „cluster of diferenciation” (din limba engleză clusters of diferenciation - CD).

Există un alt tip de limfocite - limfocite mari granulare, care diferă de limfocitele T și B mai mici nu numai prin caracteristicile structurale, ci și prin absența unui receptor care recunoaște antigenul. Aceste celule sunt numite "ucigași naturali": sunt capabili să omoare celulele țintă sau celulele tumorale infectate cu diferite viruși (vezi Tabelul 1).

Tabelul 1. Clasificarea limfocitelor umane

celulele T efect distructiv asupra următoarelor obiecte:

1. Celulele maligne.

2. Celulele infectate cu microorganisme.

3. Organe și țesuturi transplantate.

Întreaga celulă este implicată în atac, deci răspunsul este numit imunitatea celulară.

Astfel, există două tipuri principale de răspuns imun:

· Imunitatea celulară este o funcție a limfocitelor T.

· imunitate umorală- cu participarea limfocitelor B.

Există o altă subpopulație de limfocite T: limfocite T reglatoare, celule T reglatoare (Treg), T-supresoare- regulatori centrali ai raspunsului imun. Funcția lor principală este de a controla puterea și durata răspunsului imun prin reglarea funcției celulelor T-efectoare (T-helper și T-citotoxice).

Orez. 2. Schema generală a răspunsului imun

Fenomenul de suprimare a răspunsului imun este cunoscut de mult timp, dar mecanismele acestuia nu erau cunoscute. Prin urmare, s-a sugerat existența unor celule T-supresoare specifice, dar existența acestor celule nu a fost confirmată experimental mult timp. Abia la sfârșitul anilor 1990 și începutul anilor 2000 s-a demonstrat că anumite celule T au un fenotip CD25+FOXP3+ și suprimă eficient răspunsul imun.

13. imunitatea, mecanismele sale nespecifice și specifice:

adaptiv ( învechit imunitatea dobândită, specifică) are capacitatea de a recunoaște și de a răspunde la antigenele individuale, se caracterizează printr-un răspuns clonal, celulele limfoide sunt implicate în reacție, există memorie imunologică și este posibilă autoagresiunea.

clasificate în active și pasive.

Imunitatea activă dobândită apare după o boală sau după administrarea unui vaccin.
Imunitatea pasivă dobândită se dezvoltă atunci când anticorpii gata preparati sunt introduși în organism sub formă de ser sau transferați la un nou-născut cu colostrul mamei sau in utero.

O altă clasificare împarte imunitatea în naturală și artificială.

Imunitatea naturală include imunitatea înnăscută și activă dobândită (după o boală), precum și imunitatea pasivă atunci când anticorpii sunt transferați copilului de la mamă.
Imunitatea artificială include dobândită activă după vaccinare (vaccinare) și dobândită pasivă (administrare de ser).

Imunitatea înnăscută (nespecifică) se datorează capacității de a identifica și neutraliza o varietate de agenți patogeni în funcție de cele mai conservatoare, caracteristici comune pentru ei, distanța relației evolutive, înainte de prima întâlnire cu ei. În 2011, a fost acordat Premiul Nobel pentru Medicină și Fiziologie pentru studiul noilor mecanisme ale imunității înnăscute (Ralph Steinman, Jules Hoffman și Bruce Boettler).

Este efectuată în principal de celule din seria mieloide, nu are o specificitate strictă pentru antigene, nu are un răspuns clonal și nu are o memorie a contactului inițial cu un agent străin.

14. Sistem mononuclear-fagocitar:

Sistemul fagocitar mononuclear(greacă monox one + lat. nucleos nucleu: grecesc phagos devorând, absorbant + gistol. sutus cell; sinonim: sistem macrofag, sistem monocite-macrofag) - un sistem fiziologic de apărare al celulelor care au capacitatea de a absorbi și digera material străin. Celulele care alcătuiesc acest sistem au o origine comună, se caracterizează prin asemănări morfologice și funcționale și sunt prezente în toate țesuturile corpului.

La baza conceptului modern al sistemului de fagocite mononucleare este teoria fagocitară dezvoltată de I.I. Mechnikov la sfârșitul secolului al XIX-lea și învățătura patologului german Aschoff (K. A. L. Aschoff) despre sistemul reticuloendotelial (RES). Inițial, RES a fost identificat morfologic ca un sistem de celule ale corpului capabil să acumuleze colorantul vital carmin. Pe această bază, histiocitele de țesut conjunctiv, monocitele din sânge, celulele Kupffer hepatice, precum și celulele reticulare ale organelor hematopoietice, celulele endoteliale ale capilarelor, sinusurile măduvei osoase și ganglionii limfatici au fost atribuite RES. Odată cu acumularea de noi cunoștințe și îmbunătățiri metode morfologice cercetare, a devenit clar că ideile despre sistemul reticuloendotelial sunt vagi, nu specifice, iar într-o serie de prevederi sunt pur și simplu eronate. Deci, de exemplu, celulele reticulare și endoteliul sinusurilor măduvei osoase și ganglionilor limfatici perioadă lungă de timp a fost atribuit rolul unei surse de celule fagocitare, care s-a dovedit a fi incorect.

S-a stabilit acum că fagocitele mononucleare provin din monocitele circulante din sânge. Monocitele se maturizează în măduva osoasă, apoi intră în sânge, de unde migrează către țesuturi și cavități seroase, devenind macrofage. Celulele reticulare îndeplinesc o funcție de susținere și creează așa-numitul micromediu pentru celulele hematopoietice și limfoide. Celulele endoteliale efectuează transportul substanțelor prin pereții capilarelor. Celulele reticulare și endoteliul vascular nu sunt direct legate de sistemul de protecție al celulelor. În 1969, la o conferință din Leiden dedicată problemei RES, conceptul de „sistem reticuloendotelial” a fost recunoscut ca învechit. În schimb, se adoptă conceptul de „sistem de fagocite mononucleare”. Acest sistem include histiocite ale țesutului conjunctiv, celule Kupffer ale ficatului (reticuloendoteliocite stelate), macrofage alveolare ale plămânilor, macrofage ale ganglionilor limfatici, splină, măduvă osoasă, macrofage pleurale și peritoneale, osteoclaste ale țesutului osos, microglia a țesutului nervos. , sinoviocite ale membranelor sinoviale, celule Langergais ale pielii, dendrocite granulare nepigmentate. Există gratuite, adică se deplasează prin țesuturi și macrofage fixe (rezidente), având un loc relativ permanent.

Macrofagele țesuturilor și cavităților seroase, conform microscopiei electronice cu scanare, au o formă apropiată de sferică, cu o suprafață pliată neuniformă formată de membrana plasmatică (citolemă). În condiții de cultivare, macrofagele se răspândesc pe suprafața substratului și capătă o formă aplatizată, iar atunci când se deplasează, formează multiple pseudopode polimorfe.

O caracteristică ultrastructurală caracteristică a unui macrofag este prezența în citoplasmă a numeroșilor lizozomi și fagolizozomi sau vacuole digestive. Lizozomii contin diverse enzime hidrolitice care asigura digestia materialului absorbit. Macrofagele sunt celule secretoare active care eliberează enzime, inhibitori și componente ale complementului în mediu. Principalul produs secretor al macrofagelor este lizozima. Macrofagele activate secretă proteinaze neutre (elastaza, colagenază), activatori de plasminogen, factori de complement precum C2, C3, C4, C5 și interferon.

Celulele sistemului fagocitar mononuclear au o serie de funcții, care se bazează pe capacitatea lor de a endocitoză, adică. absorbția și digestia particulelor străine și a lichidelor coloidale. Datorită acestei abilități, ei îndeplinesc o funcție de protecție. Prin chemotaxie, macrofagele migrează către focarele de infecție și inflamație, unde efectuează fagocitoza microorganismelor, uciderea și digestia acestora. În condiții de inflamație cronică, pot apărea forme speciale de fagocite - celule epitelioide (de exemplu, într-un granulom infecțios) și celule multinucleate gigant de tipul de celule Pirogov-Langhans și tipul de celulă cu corp străin. care se formează prin fuziunea fagocitelor individuale într-un policarion - o celulă multinucleară. În granuloame, macrofagele produc glicoproteina fibronectină, care atrage fibroblastele și contribuie la dezvoltarea sclerozei.

Celulele sistemului fagocitelor mononucleare participă la procesele imunitare.

Astfel, o condiție indispensabilă pentru dezvoltarea unui răspuns imun direcționat este interacțiunea primară a unui macrofag cu un antigen. În acest caz, antigenul este absorbit și procesat de macrofag într-o formă imunogenă. Stimularea imună a limfocitelor are loc prin contact direct cu un macrofag care poartă un antigen convertit. Răspunsul imun în ansamblu este realizat ca o interacțiune complexă în mai multe etape a limfocitelor G și B cu macrofagele.

Macrofagele au activitate antitumorală și prezintă proprietăți citotoxice împotriva celulelor tumorale. Această activitate este deosebit de pronunțată la așa-numitele macrofage imune, care lizează celulele țintă tumorale la contactul cu limfocitele T sensibilizate purtătoare de anticorpi citofili (limfokine).

Celulele sistemului fagocitelor mononucleare sunt implicate în reglarea hematopoiezei mieloide și limfoide. Astfel, insulele hematopoietice din măduva osoasă roșie, splina, ficat și sacul vitelin al embrionului se formează în jurul unei celule speciale - macrofagul central, care organizează eritropoieza insulei eritroblastice. Celulele Kupffer ale ficatului sunt implicate în reglarea hematopoiezei prin producerea eritropoietinei. Monocitele și macrofagele produc factori care stimulează producția de monocite, neutrofile și eozinofile. În glanda timus (timus) și zonele dependente de timus ale organelor limfoide au fost găsite așa-numitele celule interdigitante - elemente stromale specifice, legate și de sistemele fagocitelor mononucleare, responsabile de migrarea și diferențierea limfocitelor.

Funcția metabolică a macrofagelor este participarea lor la metabolismul fierului.

În splină și măduva osoasă, macrofagele efectuează eritrofagocitoză, în timp ce acumulează fier sub formă de hemosiderina și feritina, care pot fi reutilizate de eritroblaste.

15. Leucocitele și tipurile sale. Leucopenie:

Formula leucocitară- acesta este procentul anumitor tipuri de leucocite din sângele periferic. Formula leucocitară este modificată într-un anumit mod, tipic pentru fiecare boală specifică. Leucocitele la diverse boli, mai des cu infecții, se modifică cantitativ.

O creștere a numărului de leucocite este leucocitoza, o scădere este leucopenia.

Leucocitoza poate fi fiziologică și patologică, prima apare în oameni sanatosi, al doilea - în unele condiții dureroase. Leucocitoza - schimbare compozitia celulara sânge, caracterizat printr-o creștere a numărului de leucocite. Norma leucocitelor din sânge este de 3,5 - 8,8 × 109 / l, dar această cifră poate varia în sus sau în jos, în funcție de laborator și de metodele utilizate.

Leucocitoza poate fi fiziologică și patologică, prima apare la oameni sănătoși, a doua - în unele stări de boală. Fiziologice includ leucocitoza alimentară (după masă), miogenă (după efort fizic), leucocitoza femeilor însărcinate etc. Leucocitoza patologică este cauzată de reacția organelor hematopoietice la iritația cauzată de agenți infecțioși, toxici, purulent-inflamatori, radiații și alți agenți. Se observă și în timpul necrozei tisulare (infarct miocardic, dezintegrare tumorală), după sângerări majore, leziuni, leziuni cerebrale traumatice etc. De regulă, leucocitoza dispare împreună cu cauza care a provocat-o. Leucocitoza tranzitorie, caracterizată prin apariția în sânge a leucocitelor imature, se numește reacție leucemoidă.

leucopenie- o scădere a numărului de leucocite din sânge în anumite boli infecțioase și de altă natură, precum și ca urmare a leziunilor radiațiilor, a medicamentelor sau a efectelor reflexe asupra măduvei osoase.

Daunele cauzate de radiații, contactul cu o serie de substanțe chimice (benzen, arsenic, DDT etc.) duc la leucopenie; luarea de medicamente (agenti citostatici, unele tipuri de antibiotice, sulfonamide etc.). Leucopenia apare cu infecții virale și bacteriene severe, boli ale sistemului sanguin.

Cu leucopenie, este necesar să se determine cu exactitate cauza bolii. Împreună cu infecțiile virale și bolile organelor hematopoietice, cauza leucopeniei poate fi efect secundar medicamente alopate, deoarece o serie de medicamente au un efect toxic asupra măduvei osoase și pot provoca leucopenie și agranulocitoză prin mecanisme alergice.

Tratamentul constă în prescrierea de medicamente care stimulează dezvoltarea de noi globule albe sau care stimulează eliberarea globulelor albe maturizate.

16. Reglarea leucopoiezei:

reglarea leucopoiezei. Producția de leucocite este stimulată de leucopoetine, care apar după îndepărtarea rapidă a unui număr mare de leucocite din sânge. Natura chimică și locul formării leucopoetinelor în organism nu au fost încă studiate. Leucopoieza este stimulată de acizi nucleici, produse de degradare a țesuturilor care apar atunci când sunt deteriorate și inflamate și unii hormoni. Deci, sub acțiunea hormonilor hipofizari - hormonul adrenocorticotrop și hormonul de creștere - crește numărul de neutrofile și scade numărul de eozinofile din sânge.

joacă un rol important în stimularea leucopoiezei sistem nervos. Iritarea nervilor simpatici determină o creștere a leucocitelor neutrofile din sânge. Iritația prelungită a nervului vag determină o redistribuire a leucocitelor în sânge: conținutul acestora crește în sângele vaselor mezenterice și scade în sângele vaselor periferice; iritație și excitare emoțională crește numărul de leucocite din sânge. După masă, conținutul de leucocite din sângele care circulă în vase crește. În aceste condiții, precum și în timpul lucrului muscular și al stimulilor dureroși, leucocitele situate în splină și sinusurile măduvei osoase intră în sânge.

Numărul de leucocite din sânge poate fi numărat într-o cameră de numărare Burker cu o grilă Goryaev sau în analizoare automate electronice („Celoscop”, „Kulter”, „Technikan”).

Tehnica de numărare în camera lui Burker cu grila lui Goryaev

Principiul metodei: similar unui astfel de număr de eritrocite, esența sa constă în măsurarea exactă a sângelui și diluarea acestuia într-un anumit volum de lichid, urmată de numărarea elementelor celulare într-o cameră de numărare și recalcularea rezultatului obținut de 1 sânge.

Echipamente și reactivi:

mixere sau eprubete pentru numărarea leucocitelor;

soluție 3% de acid acetic, la care se adaugă câteva picături de violet de metil sau albastru de metilen;

camera de numarare;

microscop.

Mixerul pentru leucocite diferă de cel pentru eritrocite prin faptul că are un lumen capilar mai larg și un rezervor mai mic. Pe mixer se aplică trei semne: 0,5, 1,0 și 11. Acest lucru vă permite să diluați sângele de 10 sau 20 de ori (mai des este diluat de 20 de ori).

Progresul cercetării: atunci când se iau sânge pentru numărarea leucocitelor, resturile de sânge sunt mai întâi îndepărtate de pe piele cu un tampon de vată și, prin strângerea ușoară a degetului, se eliberează o picătură proaspătă de sânge. Când se lucrează cu mixere, sângele este extras până la semnul 0,5, apoi se diluează cu o soluție 3% de acid acetic până la semnul 11. Se agită energic timp de 3 minute, apoi se scurge 1-2 picături și se umple camera de numărare. Când lucrați cu eprubete pentru numărarea leucocitelor, turnați 0,4 ml dintr-o soluție 3% de acid acetic și eliberați 0,02 ml de sânge în ea, măsurat cu o pipetă de la un hemometru Saly. Agitați bine eprubetele, apoi coborâți pipeta în lichid și, după ce ați colectat conținutul, umpleți camera de numărare. Deoarece există mult mai puține leucocite decât eritrocite, pentru a obține un rezultat fiabil și precis, calculul se efectuează în 100 de pătrate mari (nemarcate). De obicei, există 1-2 leucocite într-un pătrat mare. Numărul de leucocite din 1 µl de sânge este calculat în mod similar cu calculul numărului de eritrocite folosind formula

X \u003d (A x 4000 x C) / B,

unde X este numărul de leucocite din 1 pl de sânge; A - numărul de leucocite numărate în 1600 pătrate mici; B - numărul de pătrate mici numărate (1600); 4000 este valoarea, înmulțind cu care obținem numărul de celule în 1 µl.

Interpretarea datelor primite. Număr normal de globule albe: 4,0 - 9,0 x 10 9 /l. O scădere a numărului lor în sânge se numește leucopenie, o creștere se numește leucocitoză.

Leucocitoza pot fi absolute (adevărate) și relative (redistributive).

Leucocitoză absolută - observată în procese inflamatorii acute, necroză tisulară, infecții bacteriene acute (cu excepția febrei tifoide, bruceloză, tularemie etc.), afecțiuni alergice, tumori maligne (cu distrugere tisulară), leziuni închise hemoragii craniene și cerebrale, comă diabetică și uremică, șoc, pierdere acută de sânge, ca reacție primară - cu boala de radiații. O creștere semnificativă a numărului de leucocite are loc în leucemie.

Relativ (redistributiv) este o consecință a pătrunderii leucocitelor în fluxul sanguin din organele care servesc drept depozit pentru aceasta. Aceasta apare după mese (leucocitoză alimentară), băi calde și reci, emoții puternice (leucocitoză vegetovasculară), muncă musculară intensivă (leucocitoză miogenă) etc.

leucopenie. Leucopenia este considerată un indicator al inhibării abilității funcționale a măduvei osoase ca urmare a expunerii la substanțe toxice (arsen, benzen etc.), anumite medicamente (sulfonamide, levomicetina, butadionă, imuran, ciclofosfamidă etc.), virusuri (gripa, hepatita virala, rujeola etc.), microbi (febra tifoida, bruceloza etc.), radiatii ionizante, raze X si hipersplenism (cresterea functiei splinei).

Leucocitoza și leucopenia sunt rareori caracterizate printr-o creștere (scădere) proporțională a numărului total de leucocite de toate tipurile (de exemplu, leucocitoză cu îngroșarea sângelui); în cele mai multe cazuri, există o creștere (scădere) a numărului oricărui tip de celule, prin urmare, termenii „neutrofilie”, „neutropenie”, „limfocitoză”, „limfopenie”, „eozinofilie”, „eozinopenie”, „monocitoză” , se folosesc „monocitopenie”, „bazofilie”.

În evaluarea clinică a modificărilor numărului de leucocite mare importanță este dat procentului de forme individuale de leucocite, adică formula leucocitară.

Formula leucocitară a sângelui unei persoane sănătoase:

Mărimea relativă Mărimea absolută

Bazofile……………………….0-1% 0-0,0650 x 10 9 /l

Eozinofile…………………….0,5-5% 0,02-0,30 x 10 9 /l

Neutrofile: - mielocite…………0% absente

Metamielocite……0% absente

Înjunghiere ...... 1-6% 0,040-0,300 x 10 9 / l

Segmentat ... .47-72% 2.0-5.5 x 10 9 / l

Limfocite……………………………….19-37% 1,2-3,0 x 10 9 / l

Monocite………………………….3-11% 0,09-0,6 x 10 9 /l

Numărarea formulei leucocitelor se face în frotiuri colorate de sânge periferic. Pentru interpretarea corectă a rezultatelor studiului formulei leucocitelor, se recomandă numărarea în cantități absolute, și nu în cantități relative. Cele mai comune metode de colorare a frotiurilor conform Romanovsky-Giemsa, conform Pappenheim. Sub imersie, sunt luate în considerare cel puțin 200 de celule și apoi este derivat procentul de tipuri individuale de leucocite. Analiza leucogramei, luând în considerare alți parametri sanguini și tabloul clinic, este o metodă valoroasă de examinare, ajută la stabilirea diagnosticului și la determinarea prognosticului bolii.

Principalele cauze ale neutrofiliei.

Infecții bacteriene acute - localizate și generalizate.

Inflamație sau necroză tisulară.

Boli mieloproliferative.

Intoxicaţie.

Efecte medicinale (corticosteroizi).

Sângerare acută.

Principalele cauze ale neutropeniei.

Infecții - bacteriene (febră tifoidă, bruceloză, tularemie, paratifoidă) și virale (hepatită infecțioasă, rujeolă, gripă, rubeolă și altele).

Efecte mielotoxice și suprimarea granulocitopoiezei ( radiatii ionizante; agenți chimici - benzen, anilină, DDT; efecte medicinale - citostatice și imunosupresoare; vitamina B 12 - anemie cu deficit de folat, leucemie acută aleucemică, anemie aplastică).

Impactul anticorpilor (forme imune) - hipersensibilitate la medicamente, boli autoimune (LES, artrită reumatoidă, leucemie limfocitară cronică), manifestări izoimune (boala hemolitică a nou-născutului).

Redistribuire și depunere în organe - stări de șoc, boli cu splenomegalie și hipersplenism.

Forme ereditare (neutropenie cronică benignă familială).

Principalele cauze ale eozinofiliei.

Boli alergice.

Leziuni cronice ale pielii - psoriazis, pemfigus, eczeme.

Tumori (variante eozinofile ale leucemiei).

Alte boli - endocardita fibroplastică Leffler, scarlatina.

În faza de convalescență a infecțiilor și a bolilor inflamatorii (semn de prognostic bun).

Cauzele eozinopeniei (aneozinofilie).

Creșterea activității adrenocorticosteroizilor în organism.

Febră tifoidă.

Principalele cauze ale bazofiliei:

Leucemie mieloidă cronică și eritremie.

Principalele cauze ale monocitozei.

Infecții bacteriene subacute și cronice.

Hemoblastoze - leucemie monocitară, limfogranulomatoză, limfoame.

Alte afectiuni - LES, sarcoidoza, artrita reumatoida, monocitoza infectioasa; in perioada de recuperare din infectii, la iesirea din agranulocitoza, dupa splenectomie.

Scăderea numărului de monocite este importantă în principal în aprecierea raportului limfocite-monocitar în tuberculoza pulmonară.

Principalele cauze ale limfocitozei.

Infecții - virale acute (mononucleoză infecțioasă, rujeolă, rubeolă, varicela), bacteriene cronice (tuberculoză, sifilis, bruceloză), protozoare (toxoplasmoză).

Hemoblastoze (leucemie limfocitară, limfoame).

Alte boli - hipertiroidism, boala Addison, vitamina B 12 - anemie cu deficiență folică, anemie hipo- și aplastică.

Limfocitopenie observat în LES, limfogranulomatoză, tuberculoză larg răspândită a ganglionilor limfatici, în stadiul terminal al insuficienței renale, boala acută de radiații, stări de imunodeficiență, luarea de glucocorticoizi.

O creștere sau scădere a numărului anumitor tipuri de leucocite din sânge poate fi relativă sau absolută. Dacă se modifică doar procentul unuia sau altui tip de leucocite, atunci are loc neutrofilie relativă, eozinopenie relativă etc. O creștere sau scădere a conținutului absolut al oricărui tip de leucocite, adică numărul acestor celule pe unitatea de volum de sânge, se numește neutrofilie absolută, eozinopenie absolută etc.

Deplasarea formulei spre stânga (o creștere a numărului de forme tinere de neutrofile) este un semn de inflamație sau un proces necrotic în organism.

O deplasare a formulei leucocitelor spre dreapta este caracteristică bolii de radiații și a vitaminei B 12 - anemie cu deficit de acid folic.

Absența sau scăderea semnificativă a numărului tuturor tipurilor de leucocite granulare - granulocite (neutrofile, eozinofile, bazofile) este denumită agranulocitoză. În funcție de mecanismul de apariție, se disting mielotoxice (expunerea la radiații ionizante, luarea de citostatice) și imun (haptenă și agranulocitoză autoimună).