Activité phagocytaire des leucocytes. Statut immunitaire, phagocytose (indice phagocytaire, indice phagocytaire, indice d'achèvement de la phagocytose), sang

Activité phagocytaire des leucocytes. Statut immunitaire, phagocytose (indice phagocytaire, indice phagocytaire, indice d'achèvement de la phagocytose), sang

Activité phagocytaire des neutrophiles sanguins humains dans des milieux hypotoniques en présence d'antibiotiques

ACTIVITE PHAGOCYTAIRE DES NEUTROPHILES DU SANG HUMAIN EN MILIEU HYPOTONIQUE PAR ACTION ANTIBIOTIQUE

A.A. Mishchenko, E.M. Savelyeva

A.A. Mischenko, E.M. Savelyeva

L'activité phagocytaire des neutrophiles sanguins humains a été étudiée en milieu hypotonique et en présence de plusieurs antibiotiques. Une diminution de la tonicité de 1,5 à 2,0 fois entraîne une augmentation des paramètres de phagocytose de 16 %. En présence de furosémide, l'effet d'hypotension ne se manifeste pas. Divers antibiotiques provoquent une forte inhibition de la phagocytose.

La réaction phagocytaire des neutrophiles humains dans le milieu hypotonique et en présence d'antibiotiques a été étudiée. La diminution de la tonicité du milieu de 1,5 à 2 fois provoque une augmentation des paramètres de phagocytose de 16 %. À la présence du furosémide l'action de l'hypotonie n'est pas montrée. Divers antibiotiques ont provoqué une forte inhibition de la phagocytose.

Mots clés : neutrophile, phagocytose, activité phagocytaire, hypotension.

Mots clés : neutrophile, phagocytose, activité phagocytaire, hypotonycité.

Introduction

La principale barrière à la pénétration de l'infection dans le corps sont les muqueuses. Étant des systèmes à plusieurs composants, ils participent à de nombreuses réactions de l'organisme, y compris immunitaires. Normalement, la membrane muqueuse contient des immunoglobulines et un petit nombre de neutrophiles et de macrophages. Ce sont ces cellules qui sont les premières à entrer en contact avec les agents pathogènes, alors qu'en cas de pénétration de ces derniers dans l'épaisseur des tissus, les accumulations lymphoïdes dans l'épaisseur des muqueuses deviennent une barrière.

Comme les surfaces des muqueuses ne sont pas isotoniques avec le plasma sanguin, pour évaluer le fonctionnement des cellules système immunitaire dans de telles conditions, il convient d'effectuer des expériences en milieu anisotonique in vitro. Ainsi, il a été démontré que dans les solutions hypotoniques des leucocytes, une explosion d'oxygène est activée, le métabolisme l'acide arachidonique, la concentration en ions calcium augmente. Dans notre travail, des études de l'activité phagocytaire des neutrophiles sanguins ont été réalisées dans la simulation de conditions hypotoniques. Étant donné que dans le cas d'un processus inflammatoire dans le corps, les médecins prescrivent souvent une antibiothérapie, l'effet des antibiotiques de différentes classes sur l'activité phagocytaire des neutrophiles sanguins a également été étudié.

Objets et méthodes

Les expériences ont utilisé du sang veineux de donneurs masculins provenant de la station républicaine de transfusion sanguine (Syktyvkar). 500 μl de sang ont été placés dans les puits de la plaque pour les réactions immunologiques. Une suspension de cellules de levure (OOO Saf-Neva) préalablement lavées trois fois avec une solution de NaCl à 0,9% a été ajoutée dans chaque puits. Le nombre de cellules de levure était en moyenne de 30 000/1 µl de sang.

Pour réduire la tonicité de 2,0 et 1,5 fois, de l'eau distillée (pH 7,4) a été ajoutée aux puits. Dans un certain nombre d'expériences, du furosémide à une concentration de 1*10-5 Mol/l a également été ajouté aux puits avec des milieux iso- et hypotoniques.

Dans des expériences avec des antibiotiques, de la lincomycine, de la ceftriaxone, de l'amoxiclav et de la gentamicine ont été ajoutées aux puits à une concentration de 30 mg/L.

Les échantillons ont été incubés dans un thermostat à 37°C pendant 20 min. Ensuite, la plaque a été placée sur de la glace pour arrêter la réaction de phagocytose, et 3 frottis ont été préparés à partir de chaque puits. Après séchage et fixation, les frottis ont été colorés selon Giemsa-Romanovsky et visualisés au microscope à un grossissement en immersion de 15*90.

Les éléments suivants ont été calculés : 1) activité phagocytaire - le nombre de neutrophiles actifs sur 100 rencontrés lors de la visualisation ; 2) indice phagocytaire - le nombre moyen de cellules de levure absorbées par un neutrophile. Les résultats ont été traités par la méthode des comparaisons appariées, la significativité des différences entre les échantillons a été évaluée à l'aide du test de Wilcoxon.

résultats et discussion

Chez le témoin, l'activité phagocytaire des leucocytes sanguins humains était de 49,5 ± 5 %, l'indice phagocytaire était de 1,64 ± 0,1 (n = 20). Les données sont cohérentes avec les résultats obtenus dans l'étude de la phagocytose des Candida crusei pathogènes. L'activité phagocytaire des neutrophiles dans ces conditions est stimulée par les P-glucanes dans paroi cellulaire levure, pour laquelle il existe des récepteurs à la surface des phagocytes, ainsi que l'effet opsonisant des composants du système du complément C3bi et IgG immunoglobulines.

Avec une diminution de la tonicité du milieu de 1,5 et 2,0 fois (n = 20), l'activité phagocytaire a augmenté en moyenne de 16,5 %, s'élevant à 58,1 ± 9,1 % (p<0.05). Увеличился также фагоцитарный индекс до 1.97±0.06 и 2.14±0.58 при снижении тоничности в 1.5 и 2.0 раза соответственно. Таким образом, гипотония вызвала активацию фагоцитоза, что отразилось в увеличении как доли активных клеток, так и скорости поглощения фагоцитами дрожжей. Одним из механизмов такого

l'action de l'hypotension peut être une augmentation de la concentration de calcium intracellulaire, entraînant des modifications du cytosquelette des cellules, de leur mobilité et de leur activité phagocytaire. De plus, l'activité cellulaire dans ces conditions peut changer suite au déclenchement de la réduction du volume régulateur, RVD, en réponse au gonflement cellulaire. Afin d'exclure l'influence de ce dernier, le furosémide a inhibé le cotransport K+,Cl", dont l'activation conduit à la RVD. ), ce qui est cohérent avec les données publiées. Le furosémide n'a pas modifié l'activité phagocytaire dans l'environnement hypotonique par rapport au témoin et l'a réduit par rapport aux résultats en milieu hypotonique en l'absence de substance (p<0.05). В частности, в присутствии фуросемида фагоцитарная активность и фагоцитарный индекс составили 45.9±6.7%; 1.83±0.1 и 50.5±5.6%; 1.7±0.1 соответственно при

hypotonie 1,5 et 2,0. Par conséquent, en bloquant la réponse RVD, le furosémide a ainsi empêché l'activation cellulaire dans des conditions d'hypotension.

Sous l'action des antibiotiques, les indicateurs de l'activité phagocytaire ont diminué. Sous l'action de la ceftriaxone, l'activité phagocytaire a diminué de 78 % à 10 ± 2,3 % (p<0.02), амоксиклав - на 70% до 17±3.9% (р<0.02), линкомицин - на 65% до 16±4.9% (р<0.02), гентамицин - на 76% до 11±3.6% (р<0.02). Фагоцитарный индекс в экспериментах с антибиотиками практически оставался неизменным, следовательно, данные препараты не влияют на скорость поглощения клеток.

Une augmentation de l'activité phagocytaire sous l'influence des antibiotiques a été notée dans un certain nombre de travaux. Selon d'autres données, l'activité phagocytaire des leucocytes est supprimée par l'action d'antibiotiques tels que l'auréomycine. L'oxytstracycline, l'érythromycine, le chloramphénicol, la polymyxine B ne provoquent pas de modifications notables de l'activité phagocytaire des leucocytes.

Les antibiotiques utilisés dans les expériences appartiennent à différents groupes selon leur action. L'amoxiclav et la ceftriaxone agissent comme des médicaments bactéricides (inhibent le développement de la paroi cellulaire et inhibent la synthèse du peptidoglycane, la muréine, spécifique de la paroi cellulaire bactérienne). La lincomycine et la gentamicine à faible concentration agissent comme bactériostatiques et bactéricides - avec une concentration croissante (inhibent la synthèse des protéines en se liant aux sous-unités 50 et 30 du ribosome). Tous les antibiotiques de nos expériences ont eu un effet inhibiteur sur les neutrophiles. Cela peut être dû à une modification de la structure

médicaments antibactériens dus à des processus métaboliques dans le corps, à la suite desquels les produits métaboliques deviennent toxiques pour

les phagocytes eux-mêmes. Les antibiotiques sont l'une des principales causes de neutropénie et d'agranulocytose. Cet effet a été exercé par les pénicillines, les céphalosporines et les sulfamides. L'aminoglycoside gentamicine augmente la production de lysosomes contenant divers facteurs de virulence. Les représentants des antibiotiques P-lactamines, l'amoxiclav et la ceftriaxone, peuvent supprimer la réaction d'éclatement oxydatif.

Les données sur l'effet des lincosamines, dont la lincomycine utilisée, sur l'activité phagocytaire sont contradictoires. À différentes concentrations du médicament, les auteurs notent à la fois une augmentation de l'activité phagocytaire et sa diminution ou son absence de changement. Il est possible que la concentration d'antibiotiques utilisée dans nos expériences ait été toxique pour les cellules.

1. Chez le témoin, l'activité phagocytaire et l'indice phagocytaire étaient de 49,5 ± 5 % et 1,64 ± 0,1, respectivement.

2. Le remplacement d'un milieu isotonique par un milieu hypotonique entraîne une augmentation de l'activité phagocytaire et de l'indice phagocytaire de 16,5 % et de 1,5 à 2 fois, respectivement.

3. En présence de furosémide, l'effet de l'hypotension sur l'activité phagocytaire des neutrophiles ne se manifeste pas.

4. Les antibiotiques ceftriaxone, amoxiclav, lincomycine et gentamicine provoquent une inhibition de l'activité phagocytaire des neutrophiles de 78 %, 76 %, 65 % et 70 %, respectivement.

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Problèmes de famine thérapeutique. Études cliniques et expérimentales [les quatre parties !] Petr Kuzmich Anokhin

Activité phagocytaire des leucocytes du sang périphérique pendant la famine complète et la nutrition ultérieure chez l'homme Yu. L. SHAPIRO, Yu. S. NIKOLAEV, A Ya.

Activité phagocytaire des leucocytes du sang périphérique pendant la famine complète et la nutrition subséquente des personnes

Y. L. SHAPIRO, Y. S. NIKOLAEV, A Y. TABAKH, L. F. LEVINA (Moscou)

L'étude de l'activité phagocytaire des leucocytes au cours d'une famine alimentaire complète et de longue durée est consacrée à des travaux uniques.

Selon certains auteurs, l'activité phagocytaire pendant la famine à court terme (jusqu'à 36 heures) a augmenté de 3 fois (3). L'activité phagocytaire des neutrophiles de l'exsudat du péritoine de rats affamés jusqu'à la période, accompagnée d'une perte de poids corporel de 25 à 30% de l'original, n'a pas réellement changé (10).

Nous avons mené une étude de l'activité phagocytaire des leucocytes du sang périphérique chez 21 malades mentaux pendant le jeûne thérapeutique et pendant la récupération ultérieure. Parmi les personnes interrogées - 19 hommes et 2 femmes. L'âge variait de 25 à 40 ans.

Selon le diagnostic, les patients se répartissaient comme suit : schizophrénie, forme simple - 4 ; schizophrénie, forme paranoïaque - 1 ; syndrome hypocondriaque - 7; développement de la personnalité hypocondriaque sur une base somatique - 3, état dépressif - 1; syndrome asthéno-névrotique-1 ; obsession-1 ; syndrome diencéphalique, effets résiduels de lésions infectieuses du système nerveux central - 1 ; maladie organique du SNC-1.

Les durées d'inanition thérapeutique variaient de 17 à 37 jours. La perte de poids corporel n'a pas dépassé 20% de l'original.

L'activité phagocytaire des leucocytes a été déterminée par la méthode de E. A. Kost et M. I. Stenko (6).

Tableau 1

nombre phagocytaire

Tableau 2

Indice phagocytaire

La procédure était la suivante : un mélange constitué de 1 volume de citrate de sodium à 5 %, 2 volumes de sang et 1 volume d'une culture vivante d'un jour de Staphylococcus aureus dilué à 2 ml a été placé dans un thermostat à 37 °C pendant 30 minutes. Des frottis ont été préparés à partir du mélange, qui ont été fixés avec de l'alcool méthylique. La coloration a été réalisée selon Romanovsky - Giemsa.

Dans les frottis, le nombre de neutrophiles phagocytés pour 100 cellules et le nombre de microbes phagocytés dans un neutrophile ont été comptés. Le nombre de cellules phagocytaires pour 100 neutrophiles a été désigné par le "nombre phagocytaire" - F. Ch. Le nombre moyen de microbes phagocytés par un leucocyte neutrophile a été désigné par "l'indice phagocytaire" ou "l'indice phagocytaire" - F. P.

Avec la définition de l'indice phagocytaire et phagocytaire. nombre étudié l'intensité de la digestibilité des microbes. A cet effet, ces derniers ont été subdivisés en clair (soumis à une lyse importante) et en foncé (la lyse était moins prononcée). De plus, le degré de variabilité de la phagocytose des staphylocoques par les neutrophiles individuels (V en %) a également été pris en compte.

Dans la plupart des cas, des études ont été menées sur la dynamique du jeûne et de la nutrition ultérieure. Les données obtenues ont été regroupées en fonction des périodes attribuées à cette condition chez les personnes (Yu. S. Nikolaev) (2), traitées statistiquement et résumées dans les tableaux 1, 2, 3.

Tableau 3

Digestion intracellulaire des staphylocoques

Comme on peut le voir dans le tableau 1, le nombre phagocytaire (F. Ch.), pris en moyenne pendant toutes les périodes de jeûne et de nutrition ultérieure, ne différait pratiquement pas du niveau initial (avant le jeûne) (P> 0,1).

L'indice phagocytaire (P.P.), reflétant l'intensité de la phagocytose, s'est avéré aussi stable que le nombre phagocytaire pendant toutes les périodes de jeûne et d'alimentation subséquente (P>0,05).

Le tableau 3 montre que le processus de digestion intracellulaire des staphylocoques (dans nos études, déterminé par le rapport du nombre de microbes lysés sombres non digérés à plus clairs) n'a pas changé de manière significative pendant toutes les périodes de famine et de nutrition examinées.

Ainsi, les indicateurs moyens reflétant l'étendue et l'intensité de l'activité phagocytaire des neutrophiles du sang périphérique pendant les périodes étudiées de carence alimentaire complète (de 17 à 37 jours) et de nutrition ultérieure dans les conditions et pendant les périodes de nos observations sont restés assez stables.

Parallèlement à cela, diverses réactions individuelles ont été notées. Ainsi, dans 7 observations, une nette diminution du nombre phagocytaire et de l'indice phagocytaire a été constatée au cours de la première période de jeûne (1 à 4 jours), après quoi, en règle générale, leur augmentation a été notée à nouveau, et à la fin du période de jeûne (dans ces observations, de 17 à 27 jours), ils ont atteint les niveaux de base.

A titre illustratif, nous présentons le constat suivant :

La patiente A-va, née en 1937, a été admise le 27/XI-65, diagnostiquée TIR?, état dépressif. Perte de poids à la fin du jeûne 7 kg 500 g (12,8% de l'original) (tableau 4).

Dans les 6 autres observations au cours de la première période de famine, au contraire, une augmentation du nombre phagocytaire et de l'indice phagocytaire a été constatée. Au cours des périodes de jeûne ultérieures, ces chiffres ont quelque peu diminué, mais au moment de la fin du jeûne (18-22 jours), ils ont de nouveau atteint les chiffres initiaux.

A titre d'illustration, nous présentons l'observation suivante. Le patient A-n, né en 1928, a été admis le 28/X-65, diagnostiqué avec un développement hypocondriaque d'une personnalité psychopathique. Perte de poids à la fin du jeûne 12 kg (16,9% de l'original) (tableau 5).

Il est intéressant de noter que le parallélisme dans le changement du nombre phagocytaire et de l'indice phagocytaire n'a été principalement noté que dans la première période de famine. A long terme, on a pu voir que souvent avec une diminution du nombre phagocytaire, l'indice phagocytaire augmentait, ce qui indique une intensification de la phagocytose. Dans ces études, la variabilité maximale du nombre de microbes phagocytés a également été constatée (de 2-4 et 23-25 ​​initial à 2-4 et 32-42 le 7ème jour de jeûne).

Tableau 4

Indicateurs de l'activité phagocytaire des neutrophiles chez le patient A-oh

Affamé pendant 19 jours

Année de naissance - 1937.

Diagnostic : MDP ? Etat dépressif.

Perte de poids - 7 kg 500 g (12,8% de l'original)

Les indicateurs de l'activité phagocytaire des neutrophiles du patient A-n.

Affamé pendant 22 jours

Année de naissance - 1928.

Diagnostic : développement hypocondriaque d'une personnalité psychopathe.

Perte de poids - 12 kg (16,9% de l'original).

Comme mentionné ci-dessus, l'activité phagocytaire des leucocytes pendant la famine complète et la nutrition ultérieure des personnes n'est pratiquement pas étudiée. Le processus de phagocytose, qui reflète l'une des principales propriétés fonctionnelles des leucocytes, selon les concepts modernes, dépend au moins des conditions suivantes : 1) propriétés biologiques, physicochimiques et autres de l'objet phagocyté ; 2) influences de l'environnement entourant le phagocyte et l'objet phagocyté (protéine, lipide, composition ionique du plasma, teneur en opsonine, concentration en héparine, hormones stéroïdes, etc.) ; 3) l'état fonctionnel des phagocytes eux-mêmes.

Depuis les travaux de I. I. Mechnikov, l'opinion a été fermement établie. les caractéristiques de l'environnement et de l'objet phagocyté n'ont qu'un effet stimulant ou inhibiteur sur l'activité du processus phagocytaire. L'importance principale est attachée à l'activité fonctionnelle des phagocytes eux-mêmes, dans ce cas, les microphages - neutrophiles (1).

Il convient de souligner que quelques travaux sont consacrés à l'étude de diverses caractéristiques qui reflètent les propriétés fonctionnelles des leucocytes lors d'une famine complète et d'une nutrition ultérieure. Ainsi, nous avons observé (4) une diminution du contenu en granularité spécifique dans le cytoplasme de rats affamés. Le blanchiment du cytoplasme (diminution de la basophilie), une diminution du nombre et de l'ampleur de la granularité neutrophile ont été notés par Yu. L. Shapiro (8), dans le processus de jeûne thérapeutique des malades mentaux et de «famine volontaires » (périodes de jeûne de 9 à 40 jours). Ces changements ont augmenté quantitativement et qualitativement avec l'allongement des périodes de famine. Des changements similaires ont été trouvés dans la moelle osseuse dans les cellules de la série myéloïde. Plus clairement, ces changements ont été trouvés dans des éléments plus matures (myélocytes matures selon Rohr, stab, segmentés). Dans le même temps, une forte diminution des cellules en division mitotique de la série myéloïde a également été notée. Après la fin de la famine (après une certaine période de latence), ces changements se sont inversés. De plus, parallèlement à l'augmentation de la basophilie, une augmentation du nombre et de l'élargissement de la granularité neutrophile, une augmentation de l'activité migotique des cellules myéloïdes a été notée et une neutrophilie a été notée dans le sang périphérique avec un déplacement «régénératif» du noyau. À gauche.

Selon certaines données, lors de l'étude de l'activité motrice des globules blancs pendant 28 à 30 jours de jeûne thérapeutique, 7 patients ont montré une tendance à une certaine diminution de la «vitesse» des leucocytes uniquement à la fin des périodes de jeûne spécifiées (de 19,9 µ/min initial à 17,7 µ/min après 28-30 jours de jeûne) (5). Dans le même temps, il y a eu une diminution des neutrophiles en mouvement actif de 51 à 31%, une légère augmentation du nombre de neutrophiles en mouvement lent dans le premier type de mouvement (de 32,1% à 44,8%). Il est intéressant de noter que le nombre de neutrophiles immobiles, qui était petit même avant la famine, n'a pas augmenté pendant la famine. Une augmentation de la vacuolisation du cytoplasme des neutrophiles a également été notée, qui était la plus prononcée entre le 28 et le 30e jour de jeûne. Après la fin de la famine, l'activité motrice des neutrophiles a augmenté et le nombre de vacuoles a diminué. Plus clairement, l'activité des neutrophiles s'est manifestée de 12 à 16 jours de la période de récupération. Naturellement, ces données concernaient les périodes initiales réelles de famine. Dans la période terminale, une image différente est observée. Ainsi, selon certaines données, l'intensité des mouvements amiboïdes des leucocytes obtenus à partir d'animaux mis à mort par famine diminue plus rapidement que chez les non affamés (13). Dumm (9), en incubant une suspension de leucocytes du sang périphérique provenant de personnes en bonne santé à jeun, dans le plasma du même sang additionné de glucose (2-2,5 parties à 37°C), a déterminé la diminution du glucose et l'augmentation en acide lactique. Selon ses données, la consommation de glucose par les leucocytes des personnes en bonne santé affamées était légèrement inférieure à celle des personnes bien nourries, cependant, la différence n'était pas statistiquement significative. La production d'acide lactique par les leucocytes provenant de personnes affamées ne différait pas de la quantité produite par des personnes rassasiées. Fait intéressant, l'ajout d'insuline au milieu n'a pas toujours augmenté la consommation de glucose par les leucocytes de personnes affamées et a augmenté la consommation de glucose dans une suspension de leucocytes provenant de personnes rassasiées.

On peut voir que les données sur l'étude de certains indicateurs reflétant les propriétés fonctionnelles des leucocytes sont très peu nombreuses, et il est difficile d'expliquer la stabilité de l'activité phagocytaire notée dans nos observations par eux.

Sans aucun doute, cette question nécessite une étude approfondie de nombreux paramètres qui reflètent à la fois l'état fonctionnel des leucocytes eux-mêmes (leur teneur en substances énergétiques, enzymes, etc.) et les facteurs environnementaux.

En ce qui concerne les caractéristiques de l'activité phagocytaire des neutrophiles, notées au cours de la première période de famine, on peut supposer qu'elles dépendent de l'apparition de deux populations différentes de leucocytes dans le sang périphérique. Ainsi, Yu. L. Shapiro (7) a observé dans le sang périphérique pendant la famine à la fois des neutrophiles "avec un jeune" noyau lâche à deux segments, de grande taille, et simultanément des neutrophiles contenant 4 à 5 segments hyperchromatiques, de petite taille. Ces données ont ensuite été confirmées expérimentalement. Un certain nombre d'auteurs ont noté que chez les chiens à jeun ayant une rate extrinsèque, le nombre de leucocytes dans cette dernière était inférieur de 50 % à celui du sang de l'artère fémorale (12). Dans le même temps, les noyaux des granulocytes du sang périphérique dans la plupart des cellules contenaient 2 à 3 segments et dans la rate 4 à 5 segments ou plus. Après irritation de la rate dans le sang périphérique, le nombre de granulocytes multi-segments a augmenté de manière significative. Les auteurs concluent que lorsqu'un dépôt se forme dans la rate, des granulocytes plus matures y sont sélectivement retenus.

On peut supposer que pendant la première période de famine (considérée comme le stade d'anxiété du syndrome d'adaptation selon Selye), une partie des neutrophiles multisegmentaires se dépose à partir de la rate. Le premier groupe (neutrophiles à petit segment) pénètre vraisemblablement dans le sang périphérique à partir de la moelle osseuse. On peut supposer que le rapport de ces populations de neutrophiles (qui diffèrent en "âge" et donc en termes fonctionnels) détermine en grande partie les caractéristiques de la réaction phagocytaire lors d'un jeûne complet, en particulier dans ses périodes initiales.

La question de l'importance de la migration lors de la famine des neutrophiles, ainsi que des chylomicrons, dans le réseau capillaire des poumons, d'où, comme on le sait, peut à nouveau retourner dans le sang périphérique, reste ouverte (11).

En général, comme le montrent les données présentées, l'activité phagocytaire des neutrophiles lors de la famine complète des personnes dans les conditions et les termes de nos observations reste tout à fait intacte. Les mécanismes spécifiques qui sous-tendent la stabilité des propriétés protectrices des leucocytes pendant la famine restent mal compris, ce qui, naturellement, devrait être une incitation à poursuivre les recherches.

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Extrait du livre Problèmes de famine thérapeutique. Études cliniques et expérimentales [les quatre parties !] auteur Anokhin Petr Kuzmich

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Etude de l'activité phagocytaire des leucocytes- un test sanguin, qui vise à déterminer la capacité de réserve des neutrophiles et des monocytes à remplir leur fonction principale - l'absorption et le traitement des agents étrangers. Le test est effectué dans le complexe d'immunogrammes. Il est indiqué pour les patients souffrant d'infections récurrentes et chroniques, d'états d'immunodéficience acquise et génétique, de maladies auto-immunes et oncologiques, qui ont subi des opérations complexes, y compris la transplantation d'organes. Le sang total est analysé. L'étude est basée sur l'évaluation de la phagocytose des bactéries avec des marqueurs fluorescents. Normalement, les granulocytes phagocytaires représentent de 82 à 90% du total des monocytes phagocytaires - de 75 à 85%. Disponibilité des résultats - jusqu'à 8 jours.

L'activité phagocytaire des leucocytes est un indicateur de laboratoire qui reflète le pourcentage de neutrophiles et de monocytes capables de se lier à la microflore pathogène et de la digérer. Les phagocytes sont des cellules qui protègent le corps contre les infections. Ils sont considérés comme un composant de l'immunité innée. Dans le sang, ils sont représentés par deux types de leucocytes - les monocytes et les neutrophiles. Les monocytes sont de grandes cellules - les macrophages. Ils ont une capacité prononcée à absorber, traiter les grosses cellules et les composés organiques. Au site de l'inflammation, ils phagocytent les bactéries, la masse leucocytaire, les cellules affectées. En conséquence, les tissus sont nettoyés et préparés pour la régénération. Les neutrophiles sont des microphages ; contrairement aux monocytes, ils n'absorbent que de petites cellules et des composants organiques. Après le traitement des agents, les neutrophiles meurent, libèrent des substances qui endommagent les bactéries et les champignons, augmentent le flux de cellules immunitaires vers le site de l'inflammation.

Un test sanguin de l'activité phagocytaire des leucocytes permet d'évaluer la réserve de monocytes et de neutrophiles pour la digestion des agents étrangers. La modification des caractéristiques des phagocytes reflète non seulement la réactivité immunologique du corps, mais également les caractéristiques de certains autres processus - métabolisme des protéines et des glucides, présence d'intoxication et d'épuisement du corps, activité de récupération après des maladies, etc. Ainsi, l'analyse est utilisée non seulement en immunologie et en infectiologie, mais aussi en rhumatologie, oncologie, chirurgie. Les résultats de l'étude sont affichés en pourcentage de phagocytes actifs par rapport à leur nombre total. La détection des neutrophiles actifs et des monocytes est réalisée à l'aide de bactéries avec des marqueurs fluorescents. Le biomatériau pour l'étude est du sang total avec héparine.

Les indications

Une étude de l'activité phagocytaire des leucocytes est indiquée en cas de suspicion d'immunodéficience congénitale ou acquise. Il est prescrit pour les maladies infectieuses prolongées, chroniques et récurrentes - signe caractéristique d'une diminution de l'immunité. Le plus souvent, les patients atteints de pneumonie, de sinusite, d'otite moyenne, d'entérocolite, de candidose et de cystite sont envoyés pour analyse. En outre, les plaies non cicatrisantes à long terme, les complications après les opérations peuvent indiquer un manque de protection immunitaire. Par conséquent, l'analyse est effectuée en préparation de la chirurgie et au cours compliqué de la période postopératoire, avec une récupération à long terme des blessures et des brûlures. D'autres indications pour cette étude incluent les maladies allergiques, auto-immunes et oncologiques. Les résultats permettent d'évaluer l'activité de défense immunitaire (phagocytose) et son rôle dans le développement de la maladie.

Un test sanguin pour l'activité phagocytaire des leucocytes permet de déterminer la capacité réelle du corps à résister aux infections. Cependant, il convient de rappeler que cet indicateur change sous l'influence de nombreux facteurs. Ainsi, l'activité des monocytes et des neutrophiles diminue après un effort physique et une fatigue mentale, et augmente après un apport alimentaire riche en calories. Une autre limite de l'analyse est que la procédure d'examen prend jusqu'à 8 jours ouvrables, les résultats obtenus reflètent l'état d'il y a une semaine.

Préparation pour l'analyse et la collecte de matériel

Pour étudier l'activité phagocytaire des leucocytes, du sang est prélevé dans une veine. La veille de l'analyse, l'alcool doit être exclu de l'alimentation, les entraînements sportifs et autres activités physiques intenses doivent être annulés et les situations stressantes doivent être évitées. Il est également nécessaire de consulter un médecin au sujet de l'effet des médicaments pris sur le résultat de l'étude, il est possible que certains médicaments soient temporairement annulés. La procédure de prélèvement sanguin est généralement effectuée le matin, après une période de jeûne nocturne ou 4 heures après un repas.

Le sang est prélevé de la veine cubitale à l'aide d'une ponction; pour étudier l'activité phagocytaire des leucocytes, la méthode d'évaluation de la phagocytose des bactéries avec un marqueur fluorescent est le plus souvent utilisée. Les monocytes et les neutrophiles sont isolés du sang par centrifugation et lavage - le matériel d'essai. Ensuite, une culture de bactéries luminescentes est introduite dans l'échantillon, le mélange est remis en suspension et incubé, et le nombre de leucocytes qui ont phagocyté les bactéries est déterminé par l'intensité de la luminescence. Les résultats de l'analyse sont préparés dans un délai de 7 à 8 jours ouvrables. L'activité phagocytaire des monocytes et des neutrophiles peut également être déterminée par d'autres méthodes, par exemple par coloration des cellules phagocytées (méthode Romanovsky-Giemsa), par l'activité des enzymes lysosomales, par la production de cytokines, par la présence de protéines cationiques.

Valeurs normales

Le résultat d'un test sanguin pour l'activité phagocytaire des leucocytes est exprimé en pourcentage de cellules phagocytaires par rapport à leur nombre total. Les valeurs normales pour les granulocytes sont de 82 à 90%, pour les monocytes - de 75 à 85%. Ces chiffres sont les mêmes pour les patients de tous âges et des deux sexes. Une diminution physiologique de la phagocytose peut être déterminée pendant la grossesse, après une activité physique ne correspondant pas au niveau d'entraînement et après un stress émotionnel.

Augmentation et diminution de l'indicateur

Une augmentation de l'activité phagocytaire des leucocytes n'a pas de signification diagnostique, des infections aiguës peuvent en devenir la cause. L'activité des monocytes et des neutrophiles augmente par rapport au niveau initial.

L'analyse de l'activité phagocytaire des leucocytes fait référence à des méthodes de recherche immunologique. Ses indicateurs permettent de déterminer la capacité de réserve des cellules sanguines à absorber et à digérer les agents infectieux, c'est-à-dire la capacité du corps à résister au développement de la maladie. Si les résultats de l'analyse sont inférieurs à la norme, il est nécessaire de consulter le médecin traitant - un immunologiste, un infectiologue, un chirurgien, un rhumatologue, un oncologue. La baisse physiologique des performances peut être corrigée par la sélection correcte de l'activité physique, la prévention du stress.

La fonction phagocytaire des cellules du sang périphérique est généralement évaluée par le pourcentage de neutrophiles phagocytaires, le nombre phagocytaire (le nombre moyen de micro-organismes capturés par un granulocyte) et l'indice phagocytaire absolu, qui est une valeur abstraite obtenue en multipliant le nombre phagocytaire par le nombre de neutrophiles phagocytaires dans 1 mm 3 de sang.

En d'autres termes, l'indice phagocytaire absolu
- c'est le nombre de microbes capables d'absorber les neutrophiles contenus dans 1 mm 3 de sang. Lors de la mise en scène des réactions de phagocytose, une suspension de micro-organismes tués et le sang du patient sont utilisés. Après incubation du sang et des bactéries dans un thermostat, des frottis sont préparés, colorés et la capacité d'absorption des granulocytes est évaluée.

Une suspension de micro-organismes vivants est également utilisée pour mettre en scène la réaction de phagocytose. Dans ces cas, l'activité phagocytaire des granulocytes sera 2 à 2 à 5 fois plus faible que dans les réactions avec des bactéries tuées.

Propriétés de formation de rosette des neutrophiles
. Ces dernières années, il a été découvert que les neutrophiles humains possèdent des récepteurs à la surface de leur membrane pour un certain nombre de composants du complément et de fragments Fc d'immunoglobulines. La présence de récepteurs pour les érythrocytes de mouton sur la membrane des neutrophiles a également été établie.

Comme les lymphocytes, les neutrophiles peuvent être divisés en populations selon leur capacité à former des rosettes spontanées avec des érythrocytes ram et à former des rosettes complémentaires avec des érythrocytes allogéniques en présence de complément et d'immunoglobulines.

La mise en scène des réactions de formation spontanée et complémentaire de rosettes de neutrophiles est similaire à la mise en scène des réactions de formation spontanée et complémentaire de rosettes de lymphocytes.

Activité complémentaire du sérum sanguin.
Les composants du complément sont biologiquement inertes, mais lorsqu'ils sont activés par le complexe antigène-anticorps, ils acquièrent les propriétés des enzymes et jouent un rôle prononcé (protecteur ou destructeur) dans la cytolyse immunitaire. En plus de la cytolyse, le complément est directement impliqué dans diverses manifestations de défense non spécifique de l'organisme et principalement dans diverses phases de la réponse inflammatoire, tant cellulaire qu'humorale.

Parmi ces manifestations, la plus étudiée est l'activité du complément, qui entraîne la libération d'histamine et une augmentation de la perméabilité capillaire, contrôle le chimiotactisme et augmente la capacité phagocytaire des granulocytes neutrophiles, favorise l'adhésion immunitaire et l'opsonisation des particules phagocytaires, la perturbation de la paroi cellulaire , etc.

En augmentant la perméabilité des petits vaisseaux sanguins, le complément semble être impliqué dans le contrôle de la migration des granulocytes.

Le système du complément est représenté par des molécules protéiques localisées dans les fractions alpha et bêta globuline et se compose de 11 protéines sériques sanguines qui constituent 9 composants.

Pour activer le système du complément, des substances spéciales sont nécessaires, à la suite desquelles les composants du complément s'activent les uns les autres dans une séquence stricte (cascade ou inclusion séquentielle) de deux manières - classique et alternative (ou properdine).

L'activation de la manière classique est provoquée par un complexe antigène-anticorps agrégé avec des immunoglobulines de classe G et M, ou par des complexes polyanion-polycation, comme par exemple le complexe héparine-protamine. Dans ce cas, le premier composant du complément (C1) forme la C1-estérase, qui clive les quatrième (C4) et deuxième (C2) composants du complément, contribuant à la formation de la C3-convertase de la voie classique.

La voie alternative d'activation du complément est évolutivement plus ancienne. Il est le plus important dans le mécanisme de défense antibactérien avant que des anticorps spécifiques ne soient produits. L'activation le long de la voie alternative est causée par des immunoglobulines agrégées des classes A et E, des polysaccharides solubles et insolubles des membranes bactériennes et ne nécessite pas la présence de composants de complément C1, C4 et C2.

Dans la première étape, une enzyme se forme à la surface de l'activateur à la suite de l'interaction des facteurs du composant C3. L'enzyme est très labile, mais est capable de cliver C3 et donc de favoriser la formation d'une convertase C3 plus efficace. La formation de la C3-convertase et le clivage sous son influence du troisième composant du complément sont les moments clés des deux voies d'activation.

A ce stade, des interactions cellulaires dépendantes du complément se produisent. Les ponts dits complémentaires sont impliqués dans l'induction des réponses immunitaires, l'élimination des complexes immuns et le contrôle des infections bactériennes. La formation de tels ponts est connue depuis longtemps sous le nom d'adhésion immunitaire.

Ce phénomène est utilisé dans le test de la rosette complémentaire. Les deux voies d'activation du complément conduisent à la génération de fragments biologiquement actifs de composants du complément. Ainsi, le système du complément est activé par des agents constamment présents dans un organisme fonctionnant normalement.

Au cours de l'évolution, des mécanismes se sont également développés pour contrôler son activation. Il existe deux principaux mécanismes de régulation de l'activation du complément. La première est inhérente au système lui-même et consiste en la labilité de la C3-convertase des deux voies, ce qui limite l'activation des composants ultérieurs du complément impliqués dans la cascade d'activation (C5 - C9).

La seconde est réalisée par des protéines inhibitrices naturelles spéciales. Parmi ceux-ci, les plus importants sont l'inhibiteur C1, qui forme un complexe avec le fragment C2, l'empêchant de cliver davantage C4 et C2, et contrôle ainsi l'assemblage de la convertase C3 de la voie classique, et l'inactivateur C3, qui sert comme principale protéine de contrôle du système du complément, clivant C3 dans la phase liquide en deux protéines hémolytiquement inactives.

Il existe des preuves de changements dans le système du complément dans diverses conditions pathologiques. Ainsi, Kassel (1977) chez plus de 5000 malades atteints d'écrevisse de diverses localisations a établi un déficit du complément et de ses composants.

Les composants individuels du complément sérique sont généralement déterminés par la méthode d'immunodiffusion radiale selon Mancini en utilisant des antisérums monospécifiques contre l'un ou l'autre composant. L'activité du complément est également évaluée par sa capacité à lyser les érythrocytes en présence d'anticorps dirigés contre eux.

L'unité d'activité hémolytique du complément est prise comme l'activité nécessaire à la lyse de 50 % des érythrocytes en présence d'anticorps. En utilisant la méthode de titrage cinétique, la réaction peut être enregistrée dans le temps. Cette réaction est qualitative et ne donne pas une idée des concentrations de complément et de ses composants.


"Correction de l'immunité chez les patients cancéreux
prostate », V.A. Savinov

  • 4. Le concept de "pathogénicité" et de "virulence" des micro-organismes. Facteurs de pathogénicité des micro-organismes.
  • 5) La capacité de synthétiser des toxines.
  • 5 Exotoxines. Classification, propriétés, mécanismes d'action
  • 6. Endotoxines. Composition, propriétés, mécanisme d'action.
  • 7. La notion d'« immunité ». Types d'immunité. Le système immunitaire du corps humain, structure.
  • 8. Antigènes d'histocompatibilité du système hla, leur classification.
  • 10. Immunité antivirale, ses caractéristiques et ses différences par rapport à l'immunité antibactérienne.
  • 11. Facteurs non spécifiques de protection du corps humain. Facteurs protecteurs humoraux (complément, lysozyme, bêta-lysines, interféron, etc.).
  • 12. Facteurs protecteurs cellulaires. Phagocytose, étapes, caractéristiques. Méthodes pour déterminer l'activité phagocytaire, l'indice phagocytaire, l'indice de phagocytose.
  • 13. Antigènes, propriétés. Traitement des antigènes par les macrophages et les lymphocytes B.
  • 14. Anticorps, leur structure, propriétés, fonctions. Taux normaux d'immunoglobulines sériques humaines.
  • 15. Anticorps monoclonaux. Hybridomes. Utilisation pratique.
  • 16. Lymphocytes T et B, caractéristiques morphologiques et fonctionnelles. Numération sanguine périphérique normale.
  • 17. Macrophages, leurs caractéristiques morphologiques et fonctionnelles, rôle dans la réponse immunitaire.
  • 18. Hypersensibilité de type immédiat, nature, mécanisme de manifestation, méthodes de diagnostic.
  • 19. Hypersensibilité de type retardé, nature, formes de manifestation, méthodes de diagnostic.
  • 20. États d'immunodéficience, classification. Le rôle de l'infection dans le développement des immunodéficiences humaines.
  • 21. Évaluation de l'état immunitaire du corps humain (méthodes cliniques et de laboratoire).
  • 22. Réaction d'agglutination, hémagglutination indirecte
  • 23. Réaction de précipitation. Ses modifications.
  • 24. Réaction de liaison du complément.
  • 25. Réaction de neutralisation.
  • 26. Dosage immunoenzymatique.
  • 27. Réaction d'inhibition de l'hémagglutination.
  • 28. Réaction de phagocytose. Utilisation pratique de la réaction de phagocytose dans l'évaluation de l'état immunitaire.
  • 29. Méthodes de génétique moléculaire pour la détection d'agents infectieux dans l'organisme (sondage ADN et ARN, réaction en chaîne par polymérase).
  • 30. Produits biologiques pour créer une immunité active. Vaccins, anatoxines. principes pour les obtenir.
  • 31. Préparations biologiques pour créer une immunité passive. Sérums thérapeutiques et immunoglobulines. principes pour les obtenir.
  • 32. Produits biologiques de diagnostic. Diagnostic des réactions sérologiques. Sérums de diagnostic. principes pour les obtenir.
  • 9. Immunité à la transplantation. Méthodes de typage des antigènes d'histocompatibilité dans la transplantation de tissus.
  • 12. Facteurs protecteurs cellulaires. Phagocytose, étapes, caractéristiques. Méthodes pour déterminer l'activité phagocytaire, l'indice phagocytaire, l'indice de phagocytose.

    Pour la survenue d'une infection, ainsi que les propriétés de l'agent pathogène, un ensemble de facteurs et de mécanismes de MK (sensibilité ou résistance à l'infection) est important.

    PEAU ET MUQUEUSE

      une barrière mécanique pour la plupart des microns - empêche la pénétration dans le corps. Desquamation constante des couches supérieures de l'épithélium, les sécrétions des glandes contribuent à l'élimination de MK de la surface.

      propriétés bactéricides dues à l'action des acides lactiques et gras, de diverses enzymes sécrétées par les glandes de la peau, du lysozyme du liquide lacrymal, de la salive et d'autres secrets.

    MICROFLORE NORMALE

      contribue à la maturation du système immunitaire,

      joue un rôle dans la protection non spécifique des zones du tractus gastro-intestinal, DP et MPT habitées par eux, tk. Les MK vivant dans certains biotopes empêchent l'adhésion et la colonisation des muqueuses par les MK pathogènes (antagonistes des pathogènes).

    Mais certains représentants de N μF peuvent provoquer des maladies en cas de pénétration en grand nombre d'un biotope à l'autre (avec dysbactériose et immunodéficience).

    FACTEURS HUMORAUX : lysozyme, complément, interférons.

    CELLULES DE PHAGOCYTES(I. I. Mechnikov en 1883). Tous les  phagocytaires sont divisés en : microphages(PMN : neutrophiles, éosinophiles et basophiles) et macrophages divers tissus de l'organisme (tissu conjonctif, foie, poumons, etc.). Les macrophages, ainsi que les monocytes sanguins et les précurseurs (promonocytes et monoblastes), sont combinés dans un système de phagocytes mononucléaires (MPS). Le SMF est phylogénétiquement plus ancien qu'immun.

    Les micro- et macrophages ont une origine myéloïde commune (de PSC). Le sang périphérique contient plus de granulocytes (cellules matures, 60 à 70 % de tous les leucocytes sanguins) que de monocytes (1 à 6 %). Les monocytes, quittant la circulation sanguine, mûrissent en macrophages tissulaires. Le foie, la rate et les poumons en sont particulièrement riches.

    La membrane de tous les phagocytes est repliée et porte de nombreux récepteurs spécifiques et marqueurs antigéniques qui sont constamment mis à jour. L'appareil lysosomal est bien développé; les lysosomes peuvent fusionner avec les membranes des phagosomes ou avec la membrane externe. Dans ce dernier cas, il se produit une dégranulation cellulaire et une sécrétion concomitante d'enzymes lysosomales dans l'espace extracellulaire.

    FONCTIONS DES PHAGOCYTES :

      Protecteur– nettoyage  des agents infectieux, des produits de décomposition des tissus, etc.

      Représentant– présentation des épitopes antigéniques sur la membrane phagocytaire

      Sécréteur– la sécrétion d'enzymes lysosomales et d'autres substances biologiquement actives (monokines) qui jouent un rôle important dans l'immunogénèse.

    ÉTAPES DE LA PHAGOCYTOSE :

      Chimiotaxie– le mouvement ciblé des phagocytes dans le sens du gradient chimique des chimioattractants (composants B!, produits de dégradation tissulaire, fractions C5a, C3a, lymphokines) est associé à la présence de récepteurs spécifiques.

      Adhésion- médiés par des récepteurs, mais des interactions physico-chimiques non spécifiques peuvent également se produire. L'adhérence précède immédiatement l'endocytose (capture).

      Endocytose= phagocytose (particules >0,1 µm) et pinocytose. Les cellules phagocytaires sont capables de capter des particules inertes (charbon, latex) en circulant autour d'elles avec des pseudopodes SANS PARTICIPATION DE RÉCEPTEURS SPÉCIFIQUES, contrairement aux bactéries, Candida et autres microbes. La phagocytose la plus efficace médiée par les récepteurs Fc et les récepteurs pour C3 - IMMUNE. À la suite de l'endocytose, un phagosome est formé.

    Seules certaines bactéries (souches capsulaires de pneumocoque, souches de streptocoque dépourvues d'acide hyaluronique et de protéine M) sont directement phagocytées. La plupart des bactéries ne sont phagocytées qu'après avoir été opsonisées par le complément et/ou les anticorps.

      digestion- se produit dans les phagolysosomes, les microns meurent sous l'action de mécanismes dépendants de l'oxygène ("oxydative burst") et indépendants de l'oxygène (protéines cationiques et enzymes (dont le lysozyme)).

    phagocytose incomplète– de nombreux B virulents ! ne meurent souvent pas et persistent longtemps à l'intérieur des phagocytes, en raison de divers mécanismes (violation de la fusion des lysosomes avec les phagosomes - toxoplasme, à confirmer; résistance aux enzymes lysosomales - gono-, staphylo-, streptocoques du groupe A, etc.; sortie du phagosome - rickettsie, etc.).

    FONCTION REPRÉSENTANTE DES MACROPHAGES consiste en la fixation sur la membrane externe des épitopes antigéniques MK. Sous cette forme, ils sont présentés pour une reconnaissance spécifique par les lymphocytes T.

    FONCTION SECRÉTOIRE est la sécrétion de substances biologiquement actives (monokines - substances qui régulent la prolifération, la différenciation et la fonction des phagocytes, des lymphocytes, des fibroblastes et d'autres cellules). Une place spéciale parmi eux est IL-1, to / y active de nombreuses fonctions des lymphocytes T, incl. production d'IL-2. De plus, l'IL-1 a les propriétés d'un pyrogène endogène (agissant sur les noyaux de l'hypothalamus antérieur). Les macrophages produisent et sécrètent prostaglandines, leucotriènes, nucléotides cycliques, radicaux oxygène (0 2, H 2 0 2), composants du complément, lysozyme et autres enzymes lysosomales, interféron. En raison de ces facteurs, les phagocytes peuvent tuer les bactéries non seulement dans les phagolysosomes, mais aussi à l'extérieur des cellules, dans le microenvironnement immédiat.

    MÉTHODES DE DÉTERMINATION DE L'ACTIVITÉ PHAGOCYTAIRE

    La réaction de phagocytose est basée sur l'opsonisation de l'agent pathogène.

    Une fraction de phagocytes est isolée du sang, des gonocoques et du sérum du patient examiné (At + C) leur sont ajoutés. Après un certain temps, les frottis sont examinés et au moins 100 phagocytes sont comptés. Parmi ceux-ci, le %  qui a capturé des microbes est déterminé. Dans N INDICATEUR DE PHAGOCYTE = 40-80 %.

    NOMBRE DE PHAGOCYTES - comptez le nombre de cellules microbiennes capturées, résumez et divisez par le nombre de phagocytes, obtenez le nombre de  microbiens absorbés par un phagocyte. Dans NFC=1-5.